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提高ELISA的精确重现性方法

免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间（批内）的重复性和多次实验之间（批间）的重复性。CV值高则表明精确度低，那么今天小编就和跟你们分享一下如何提高ELISA的精确重现性。移液技术1. 移液时，枪头应对准孔中央，避免接触孔壁及底部。2. 移液后轻轻晃动混匀试剂。3. 如果您的样品具有黏性，请预先润

TUNEL检测细胞凋亡实验荧光背景强的原因

荧光背景强度是指荧光实验中样品所在位置的荧光强度。这个强度可能会受到很多因素的影响，包括样品本身的荧光强度、样品浓度、样品体积、激发光强度和激发光波长、检测器的灵敏度和其他参数等。荧光背景强度过高可能会对荧光实验的结果产生负面影响，因此在进行荧光实验时，应注意控制荧光背景强度。具体的，可以通

非特异性染色（假阳性高）原因

若已知细胞或者组织样本依然处于活细胞状态，但是用TUNEL试剂盒检测，出现了非特异性染色，和处理过的荧光信号一样强，甚至比阳性对照组荧光信号还要强。1 样本处理不当1）使用酸性或碱性固定液，导致DNA损伤。建议使用pH中性的固定液固定组织或者细胞。2）固定液浓度过高，导致细胞自溶、DNA链不规则断裂、

荧光信号弱或没有荧光信号是什么原因

若已知细胞或者组织样本处于细胞凋亡状态，但是用TUNEL试剂盒检测发现荧光信号偏弱或没有信号。样本处理不当1）样本切片太厚。建议适当将切片切薄一点，便于染色。2）脱蜡和水化不充分。建议脱蜡先60 ºC 20 min，再使用二甲苯两次5-10 min；而水化用梯度乙醇从高到低浓度浸洗。3）Proteinase K的孵育

细胞凋亡早期：Annexin-V/PI双染色法（PS在细胞外膜上的检测）

在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，细胞发生凋亡时，细胞膜发生变化，PS从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。用荧光素（FITC、Alexa Fluor488等）标记的Annexin-V作为探

细胞凋亡早期：JC-1染色（线粒体膜电位变化的检测）

在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏，这被广泛认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如 Rhodamine 123、JC-1、JC-10等可结合到线

细胞凋亡晚期：TUNEL法（DNA片段原位标记法）

细胞凋亡晚期，染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick e

凋亡晚期检测方法（两种方法）

细胞凋亡晚期中，核酸内切酶（某些Caspase的底物）在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法：1) TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling）通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间接（通过地

菌液PCR详细操作步骤

菌液PCR详细操作步骤实验原理：不必提取目的基因DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增。称为菌液PCR，菌液PCR常用于检测菌落是否携带目标质粒。实验步骤：1.实验前试剂准备从LB固体平板中挑取的单菌落，重悬于10uL的LB液体培养基中；Fast taq酶、引物、去离子水等。

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