菌液PCR详细操作步骤

2022-12-16 10:29:33

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　　菌液PCR详细操作步骤

　　实验原理：

　　不必提取目的基因DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增。

　　称为菌液PCR，菌液PCR常用于检测菌落是否携带目标质粒。

　　实验步骤：

　　1.实验前试剂准备从LB固体平板中挑取的单菌落，重悬于10uL的LB液体培养基中；Fast taq酶、引物、去离子水等。

　　2.加样根据Taq酶试剂说明，在冰上配置PCR体系，向PCR中分别加入去离子水、2xTaq Mix、引物。接来下操作置于超净台上，在超净台中最后加入菌液模板。

　　3.PCR上机反应将PCR管放入PCR仪中，根据酶的使用说明，设置反应条件，进行PCR反应。

　　4.检测反应完毕后，样品进行琼脂糖凝胶电泳，筛选携带质粒的阳性单菌落。在成像系统中成像。

　　注意事项：

　　1.EP管和枪头等耗材要先进行高压蒸汽灭菌，去除DNA酶（无酶无菌耗材除外）。

　　2.加菌液模板时需在超净台中进行，防止挑取的单菌落污染其他杂菌。

　　3.由于实验过程存在致癌试剂，实验操作人员严格穿戴实验服和手套，保障自身安全。