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菌液PCR详细操作步骤

2022-12-16 10:29:33
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  菌液PCR详细操作步骤

  实验原理:

  不必提取目的基因DNA,不必酶切鉴定,而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增。

  称为菌液PCR,菌液PCR常用于检测菌落是否携带目标质粒。

  实验步骤:

  1.实验前试剂准备 从LB固体平板中挑取的单菌落,重悬于10uL的LB液体培养基中;Fast taq酶、引物、去离子水等。

  2.加样 根据Taq酶试剂说明,在冰上配置PCR体系,向PCR中分别加入去离子水、2xTaq Mix、引物。接来下操作置于超净台上,在超净台中最后加入菌液模板。

  3.PCR上机反应 将PCR管放入PCR仪中,根据酶的使用说明,设置反应条件,进行PCR反应。

  4.检测 反应完毕后,样品进行琼脂糖凝胶电泳,筛选携带质粒的阳性单菌落。在成像系统中成像。

  注意事项:

  1.EP管和枪头等耗材要先进行高压蒸汽灭菌,去除DNA酶(无酶无菌耗材除外)。

  2.加菌液模板时需在超净台中进行,防止挑取的单菌落污染其他杂菌。

  3.由于实验过程存在致癌试剂,实验操作人员严格穿戴实验服和手套,保障自身安全。

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