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细胞铁死亡的检测方法(4种检测方法)

2022-12-16 10:29:30
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  铁死亡(Ferroptosis )是最近几年才被发现的一种细胞死亡方式,研究中如何检测铁死亡呢?下面我们一起了解几种铁死亡的检测方法。

  铁死亡常见检测方法:

  1.CCK-8细胞活性检测

  推荐指数:★★☆☆☆

  方法:CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan),生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,可采用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,间接反映活细胞数量。可鉴定铁死亡造成的细胞死亡,但鉴定的细胞死亡,除了铁死亡造成的细胞死亡,还包括凋亡、坏死等造成的细胞死亡。

  2.铁水平检测

  推荐指数:★★★☆☆

  方法:可以使用PGSK探针,流式细胞术或共聚焦显微镜检测细胞内铁含量的细胞膜透性染料检测细胞、组织中的铁水平,在铁死亡的细胞中,PGSK的绿色荧光会减弱。铁的含量能够指示铁死亡是否发生,铁离子含量与铁死亡正相关。

  3.活性氧水平检测

  推荐指数:★★★☆☆

  方法:细胞内活性氧和脂质活性氧通过流式细胞术使用C11-BODIPY 荧光探针检测,BODIPY 581/591 C-11是一种亲脂染料,能积累在细胞膜内,用 488nm和568nm激发光激发,将检测到530nm和590nm发射光(红色荧光),当染料被氧化后,发射光将从590nm迁移到510nm(绿色荧光),荧光由红色转为绿色,荧光强度与铁死亡正相关。

  4.qRT-PCR/WB检测

  推荐指数:★★★★☆

  方法:检测与铁死亡相关的蛋白表达,如PTGS2、NOX1、FTH1、COX2、GPX4、ACSL4等,其中COX2、ACSL4、PTGS2、NOX1在铁死亡细胞中表达上调,GPX4、FTH1在铁死亡细胞中表达下调。

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