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细胞凋亡早期:Annexin-V/PI双染色法(PS在细胞外膜上的检测)

2022-12-17 10:34:53
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  在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,细胞发生凋亡时,细胞膜发生变化,PS从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜即可鉴别凋亡细胞和活细胞。

  坏死的细胞PS同样也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面,Annexin-V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin-V无法区分坏死细胞和凋亡细胞。另外碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,能够与细胞内DNA结合,而且它不能透过完整的细胞膜。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合,所以PI染料无法标记凋亡细胞和活细胞,而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合,坏死细胞内的PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光,被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用,就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。

图例

  图:Annexin-V/PI双染色后流式检测结果分析


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