若已知细胞或者组织样本处于细胞凋亡状态，但是用TUNEL试剂盒检测发现荧光信号偏弱或没有信号。
样本处理不当
1）样本切片太厚。建议适当将切片切薄一点，便于染色。
2）脱蜡和水化不充分。建议脱蜡先60 ºC 20 min，再使用二甲苯两次5-10 min；而水化用梯度乙醇从高到低浓度浸洗。
3）Proteinase K的孵育时间过短。优化Proteinase K的孵育时间，常用时间10-30 min。4 μm左右的片子孵育10 min，30μm左右的片子孵育30 min。
4）Proteinase K浓度过低。建议蛋白酶K一般工作液浓度为20 μg/mL。
5）放置在-20 ºC保存较长时间的切片不新鲜，减低染色效率。建议使用新鲜切片。
染色操作不当
6）染色时间过短。建议一般 37 ºC 孵育60 min，可以根据凋亡损伤程度，可长至2 h，但要结合背景着色。
7）TdT酶或荧光素/酶标记的dUTP浓度过低。建议适当提高TdT酶或荧光素/酶标记的dUTP浓度。
8）TdT酶失活。建议TUNEL反应液临用前配制，短时间在冰上保存。不宜长期保存，长期保存会导致TdT酶失活。
9）样本干燥。加上TUNEL反应液后，请盖上盖玻片/保鲜膜/湿盒中进行，保证样本均匀染色，又可防止反应液干燥。
荧光检测操作不当
10）操作未避光。由于荧光易碎灭，建议标记与检测样本时，载玻片要避光，观察时要尽量快。
文章推荐
业务咨询
业务咨询专线：133 7682 0615
Email:lxyjy@wie-biotech.com
