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TUNEL检测细胞凋亡实验荧光背景强的原因

2022-12-19 10:24:48
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  荧光背景强度是指荧光实验中样品所在位置的荧光强度。这个强度可能会受到很多因素的影响,包括样品本身的荧光强度、样品浓度、样品体积、激发光强度和激发光波长、检测器的灵敏度和其他参数等。

  荧光背景强度过高可能会对荧光实验的结果产生负面影响,因此在进行荧光实验时,应注意控制荧光背景强度。具体的,可以通过以下方法来减少荧光背景强度:

  1、减少样品的浓度或体积:这样可以减少样品本身的荧光强度。

  2、选择适当的激发光波长:选择一个激发光波长,使得样品的荧光强度最大,可以有效地减少荧光背景强度。

  3、使用荧光滤光片:荧光滤光片可以滤掉荧光背景中的某些波长的光,从而减少荧光背景强度。

  4、增加检测器的灵敏度:增加检测器的灵敏度可以使得更少的荧光能够被检测到,从而减少荧光背景强度。

  5、增加激发光强度:增加激发光强度可以使得样品的荧光强度增加,从而使得荧光背景强度相对减少。但要注意,过高的激发光强度也可能会对样品造成损伤,因此应适当控制激发光强度。

  6、使用荧光灯管:使用荧光灯管可以提供一种稳定的荧光背景,这样就可以减少荧光背景强度的波动。

  7、使用更高的检测器增益:使用更高的检测器增益可以使得更少的荧光能够被检测到,从而减少荧光背景强度。但要注意,过高的检测器增益也可能会导致信噪比降低,影响实验结果的准确性。

  8、使用荧光抑制剂:荧光抑制剂可以通过阻断荧光发生的途径,从而减少荧光背景强度。但要注意,荧光抑制剂可能会对样品造成不良影响,因此应慎重使用。

荧光背景强原因

  1 染色操作不当

  1)TUNEL染色时间过长。建议染色时间适当,一般是 37 ºC 孵育60 min,避免串色。

  2)TUNEL染色液浓度过大。建议增大稀释倍数,优化浓度。

  3) 使用试剂盒提供的二价阳离子优化反应,试剂盒中的Mg2+可降低背景,Mn2+可增强染色效果。

  4)PBS未充分清洗样本。在TUNEL反应后PBS清洗次数可增加到5次,来避免切片样本中残留的染料。

  2 荧光检测操作不当

  5)曝光时间过长。建议调整曝光条件,先对阴性组调整到无背景光,然后用这个曝光条件去拍摄实验组(可以微调,但是不需要大调)。


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