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2022-09-23
细胞划痕实验原理步骤及注意事项
细胞划痕实验原理细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程
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2022-09-22
DNA细胞转染实验步骤总结
下面以Entranster-H4000，DNA转染试剂为例，简要说明DNA细胞转染实验步骤1.提前一天细胞铺板提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。
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2022-09-22
细胞转染常用到的几种方法
作为一条标准的实验狗，细胞转染这条路可谓是荆棘丛生，很多实验狗们看见细胞转染率低就把细胞给扔掉了！中洪小编告诉你，千万别这样“作死”，因为实验材料也很贵的啊！！科研道路十分漫长，今天我们来看看细胞转染实验大比拼。首先我们看看细胞转染有哪些常见方式：细胞转染途径化学介导——利用载体分子
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2022-09-22
细胞转染操作详细步骤
转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法
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2022-09-22
影响PCR体系蒸发的三个因素，传统解决蒸发问题的办法
提及PCR实验，是否出现过这样的问题？假阳性非特异性扩增数据重复性差假阴性拖尾无扩增产物样本降解其实，造成这些结果的原因有很多，例如引物质量不佳、模板质量不好、退火温度不合适等，但还有一个不容忽视的问题——PCR 体系蒸发。聚合酶链式反应（PCR）需要依赖 PCR 仪对各反应
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2022-09-21
细胞冻存与复苏步骤原理与注意事项
1949 年至 1960 年这一段时间可以称为冷冻保存的“甘油时期"，这一时期对生物材料的冷冻保存一般都是以甘油作为保护剂。Lovelock（1959）等人发现了一种新的化学保护剂，这就是人们熟悉的二甲基亚砜（DMSO）。而且，用于冷冻保存的仪器也有明显的发展。目前，无论是冷冻保存理论、各种保护剂、冷冻用品和设备以及
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2022-09-21
蛋白纯化方法原理（Western blotting实验）
能从成千上万种蛋白质混合物中纯化出一种蛋白质的原因，是不同的蛋白质在它们的许多物理、化学和生物学性质有着极大的不同，这些性质是由于蛋白质的氨基酸的序列和数目不同造成的，连接在多肽主链上氨基酸残基可是荷正电的、荷负电的、极性的或非极性的、亲水的或疏水的，此外多肽可折叠成非常确定的二级结构(α螺旋、β
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2022-09-21
蛋白提取步骤，13种蛋白提取方法
单层贴壁细胞总蛋白的提取：1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液2、每瓶细胞加3ml4℃预冷的PBS。平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞 三 次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。3、按1ml裂解液加10ulPMSF(100mM),摇匀置于冰上。4、每瓶细
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2022-09-21
蛋白抽提实验基本操作步骤
蛋白抽提实验基本操作步骤1、蛋白抽提实验介绍蛋白质的抽提实验是进行蛋白质实验分析的基本操作，可用于（1）蛋白质的分离（2）蛋白质功能结构检测（3）蛋白质表达前的基本操作。蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物
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