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DNA细胞转染实验步骤总结

2022-09-22 10:35:45
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  下面以Entranster-H4000,DNA转染试剂为例,简要说明DNA细胞转染实验步骤

  1.提前一天细胞铺板

  提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。

  2.转染过程

  ⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。

  注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

  ⑵将2μl的Entranster-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成Entranster-H4000稀释液。室温静置5分钟。

  ⑶将Entranster-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

  ⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。

  注意:

  ①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。

  ②完全培养基可加抗生素。

  ⑸培养4-6小时后更换培养基,继续培养24-48小时。

  注意:

  ①如细胞没有毒性等不良情况,转染后4-6小时可不必更换培养基。

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