DNA细胞转染实验步骤总结

2022-09-22 10:35:45

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　　下面以Entranster-H4000，DNA转染试剂为例，简要说明DNA细胞转染实验步骤

　　1.提前一天细胞铺板

　　提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。

　　2.转染过程

　　⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。

　　注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

　　⑵将2μl的Entranster-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成Entranster-H4000稀释液。室温静置5分钟。

　　⑶将Entranster-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

　　⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。

　　注意：

　　①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。

　　②完全培养基可加抗生素。

　　⑸培养4-6小时后更换培养基，继续培养24-48小时。

　　注意：

　　①如细胞没有毒性等不良情况，转染后4-6小时可不必更换培养基。