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流式细胞仪对多重蛋白进行定量检测

2022-09-16 10:26:51
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  细胞因子在体内具有重要的病理作用,在感染、炎症、自身免疫病、免疫缺陷疾病等状态下,部分细胞因子会明显变化,根据这些指标可以判断机体的免疫功能。血清、血浆或组织液中细胞因子检测可以对疾病诊断和治疗做出相应评价,具有重要的应用价值。广泛应用于细胞生物学、免疫学以及肿瘤学等领域的流式细胞术是细胞因子检测的一种方法。

  由于血清、细胞培养上清、积液中的细胞因子含量低,不容易检测,加上样本数量少,传统的方法无法满足多因子检测。流式微球捕获芯片技术(CBA)微量样本多重蛋白定量技术,是用流式细胞仪对多重蛋白进行定量检测的方法,能够同时对样本中的多个指标进行定性、定量检测,可用于细胞因子检测。

  流式细胞仪技术(FCM)技术可以应用流式细胞仪,结合单克隆抗体技术、免疫荧光染

  色技术,对快速流动液体中的单细胞进行多种参数测量和分析。CBA 检测系统采用聚苯乙烯荧光微球连结特定的捕获抗体,捕捉待测物,同时再加入待测物的荧光抗体,三者形成夹心复合物,通过流式细胞仪进行检测。流式细胞术的优点是同时可以进行多参数检测,快速并且信息量大。

  (1)能够同时对单个样本进行多种检测

  小鼠血清Th1/Th2/Th17 相关细胞因子是实验中经常会用到的检测指标,由于血清量少很难运用传统的方法如ELISA法进行多因子检测,而CBA 法正好能解决这一问题,它能够一次性对血清中的IL-2、IL-4、IL-6、IFN-Υ、TNF、IL-10、IL-17A进行定量检测。美迪西可以为广大医药研发人员提供细胞因子及生物标志物的检测服务,其生物分析部基础设施齐全、仪器设备先进,拥有的流式CBA、MSD、Luminex系统等高端技术平台可以进行各种single plex或multiplex多形式的细胞因子和生物标志物的检测。

  (2)所需样本量少、灵敏度高等

  传统ELISA方法每项实验样本用量50-200μl,而流式CBA检测技术样本用量少于50μl且分析灵敏度高达2.8pg/mL。对于稀有样本,CBA只需少量样本即可检测细胞因子、抗体、抗原等多个指标。

  (3)稳定性好

  CBA 稳定性好、可重复性高,能避免酶联免疫放大技术使信号失真导致的假阳性。

  流式细胞术检测用于细胞因子检测是一种相对快速、重复性好并能准确定量的方法。但由于胞内分析步骤复杂,涉及变异因素多,可能会出现结果不稳定,较难重复等问题。

  如在检测血清时,由于血清成分复杂,细胞因子含量差距大,实验中经常会出现分群不明显、微球聚集、浓度太低等现象,对实验结果造成很大影响。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成,血清加入微球之后如果没有充分涡旋,容易沉淀聚集,细胞因子不能充分跟微球结合,导致多群甚至聚集现象发生,检测结果将是无效的。需要从制备混合微球开始到加入实验管,直到上机检测前每一步都必须充分涡旋,以避免微球发生聚集。

  而且CBA操作过程繁琐,对实验人员技术要求高,从一定程度上限制了其广泛使用。因此在具体实验过程中,需要多次摸索,结合实验中所遇到的问题进行分析,找出解决问题的办法,并在今后实验中规避实验中的一些问题的出题,来提高实验的有效性和准确性。

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