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小鼠腹腔取材法——培养巨噬细胞的方法

2022-09-16 10:22:17
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  巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW264.7等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法最为实用,其法如下:

  1、实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml(勿注入肠内)。

  2、引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。

  3、置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。

  4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。

  5、用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。

  6、小心拔出针头,把液体注入离心管中,250g4℃离心10分钟,去上清,加10mlEagle培养基。

  7、计数细胞,每只小鼠可产生20~30×105细胞,其中90%为巨噬细胞。

  8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米,需接种2.5×106/ml。

  9、为纯化培养细胞,去除其它白细胞,接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1~2次后,再加新Eagle培养液置37℃,5%CO2温箱中培养。

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