单层贴壁细胞总蛋白的提取：

　　1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液

　　2、每瓶细胞加3ml4℃预冷的PBS。平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞 三 次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。

　　3、按1ml裂解液加10ulPMSF(100mM),摇匀置于冰上。

　　4、每瓶细胞加400ul含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。

　　5、裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧，然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。

　　6、于4℃下12000rpm离心5min。

　　7、将离心后的上清分装转移到0.5min的离心管中放于-20℃中保存。

　　组织中总蛋白的提取：

　　1、将少量组织块置于1-2ml匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织快尽量剪碎。

　　2、加400ul单去污剂裂解液裂于匀浆器中，进行匀浆。然后置于冰上。

　　3、几分钟后再碾一会儿再置于冰上，要重复碾几次使组织尽量碾碎。

　　4、裂解30min后，即可用移液器将裂解液移至1.5ml离心管中，然后在4℃下12000rpm离心5min，取上清分装于 0.5ml离心管中并置于-20℃保存。

　　加药物处理的贴壁细胞总蛋白的提取：

　　由于受药物的影响，一些细胞脱落下来，所以除按1）操作外还应收集培养液中的细胞。以下是培养液中细胞总蛋 白的提取：

　　1、将培养液倒置15ml离心管中，于2500rpm离心5min。

　　2、弃上清，加入4mlPBS并用枪轻轻吹打洗涤，然后2500rpm离心5min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。

　　3、用枪洗干上清后，加100ul裂解液冰上裂解30min，裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。

　　4、将裂解液与培养瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm离心5min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于-20℃保 存。