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蛋白提取步骤,13种蛋白提取方法

发布时间:2022-09-21 10:27:32 阅读:12692次 来源:百度学术

  单层贴壁细胞总蛋白的提取:

  1、倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液

  2、每瓶细胞加3ml4℃预冷的PBS。平放轻轻摇动1min洗涤细胞,然后弃去洗液。重复以上操作两次,共洗细胞 三 次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。

  3、按1ml裂解液加10ulPMSF(100mM),摇匀置于冰上。

  4、每瓶细胞加400ul含PMSF的裂解液,于冰上裂解30min,为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。

  5、裂解完后,用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧,然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。

  6、于4℃下12000rpm离心5min。

  7、将离心后的上清分装转移到0.5min的离心管中放于-20℃中保存。

  组织中总蛋白的提取:

  1、将少量组织块置于1-2ml匀浆器中球状部位,用干净的剪刀将组织快尽量剪碎。

  2、加400ul单去污剂裂解液裂于匀浆器中,进行匀浆。然后置于冰上。

  3、几分钟后再碾一会儿再置于冰上,要重复碾几次使组织尽量碾碎。

  4、裂解30min后,即可用移液器将裂解液移至1.5ml离心管中,然后在4℃下12000rpm离心5min,取上清分装于 0.5ml离心管中并置于-20℃保存。

  加药物处理的贴壁细胞总蛋白的提取:

  由于受药物的影响,一些细胞脱落下来,所以除按1)操作外还应收集培养液中的细胞。以下是培养液中细胞总蛋 白的提取:

  1、将培养液倒置15ml离心管中,于2500rpm离心5min。

  2、弃上清,加入4mlPBS并用枪轻轻吹打洗涤,然后2500rpm离心5min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。

  3、用枪洗干上清后,加100ul裂解液冰上裂解30min,裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。

  4、将裂解液与培养瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm离心5min,取上清分装于0.5ml离心管中并置于-20℃保 存。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1610.html

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