三步法（以SP试剂盒为例）

　　1. 石蜡切片脱蜡至水。

　　2. 蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，如需采用抗原修复，可在此步后进行。

　　3.3%H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗，2分钟×3次。

　　4. 5~10%正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。

　　5.PBS冲洗，2分钟×3次。

　　6.滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或滴加**代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10~20分钟。

　　7. PBS冲洗，2分钟×3次。

　　8.滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或**代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~20分钟。

　　9.PBS冲洗，2分钟×3次。

　　10. 显色剂显色（DAB或AEC）。

　　11.自来水充分冲洗，复染，脱水透明（如需要）、封片。

　　二步法（以PV-9000通用型二步法检测试剂盒为例）

　　1. 石蜡切片脱蜡至水。

　　2.蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，如需采用抗原修复，可在此步后进行。

　　3.3% H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗，2分钟×3次。

　　4.滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。

　　5.PBS冲洗，2分钟×3次。

　　6. 滴加试剂1（Polymer Helper），室温或37℃孵育20分钟，PBS或TBS冲洗，2分钟×3次。

　　7. 滴加试剂2（poly peroxidase-anti-mouse/rabbit IgG），室温或37℃孵育20~30分钟，PBS或TBS冲洗，2分钟×3次。

　　8. PBS冲洗，2分钟×3次。

　　9.显色剂显色（DAB或AEC）。

　　10自来水充分冲洗，复染，脱水透明（如需要）、封片。