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石蜡切片免疫组化染色步骤

2023-03-14 10:29:28
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  三步法(以SP试剂盒为例)

  1. 石蜡切片脱蜡至水。

  2. 蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟,如需采用抗原修复,可在此步后进行。

  3.3%H2O2室温孵育5~10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性,PBS冲洗,2分钟×3次。

  4. 5~10%正常山羊血清封闭,室温孵育10分钟。倾去血清,勿洗,滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小时或4℃过夜。

  5.PBS冲洗,2分钟×3次。

  6.滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS稀释),37℃孵育10~30分钟;或滴加**代生物素标记二抗工作液,37℃或室温孵育10~20分钟。

  7. PBS冲洗,2分钟×3次。

  8.滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS稀释),37℃孵育10~30分钟;或**代辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃或室温孵育10~20分钟。

  9.PBS冲洗,2分钟×3次。

  10. 显色剂显色(DAB或AEC)。

  11.自来水充分冲洗,复染,脱水透明(如需要)、封片。

  二步法(以PV-9000通用型二步法检测试剂盒为例)

  1. 石蜡切片脱蜡至水。

  2.蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟,如需采用抗原修复,可在此步后进行。

  3.3% H2O2室温孵育5~10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性,PBS冲洗,2分钟×3次。

  4.滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小时或4℃过夜。

  5.PBS冲洗,2分钟×3次。

  6. 滴加试剂1(Polymer Helper),室温或37℃孵育20分钟,PBS或TBS冲洗,2分钟×3次。

  7. 滴加试剂2(poly peroxidase-anti-mouse/rabbit IgG),室温或37℃孵育20~30分钟,PBS或TBS冲洗,2分钟×3次。

  8. PBS冲洗,2分钟×3次。

  9.显色剂显色(DAB或AEC)。

  10自来水充分冲洗,复染,脱水透明(如需要)、封片。

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