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冰冻切片的免疫组化染色步骤

2023-03-14 10:23:44
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  冰冻切片的免疫组化染色步骤

  1.速冻组织 将组织块平放于软塑料盖或特制小盒内(直径2cm),如组织块小可适当的加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时就开始气化沸腾,此时小盒保持原位不要浸入液氮内,大约10-20秒组织即立刻冰冻成块。

  2.切片 取出组织冰块迅速置入-80℃冰箱留着备用,或置于恒冷切片机冰冻切片。冰冻切片4~8mm。

  3.保存 冰冻切片后如不染色,吹干,储存低温冰箱内,或进行短暂预固定后储存冰箱内保存。

  4.固定 室温放置30分钟后,入4℃丙酮固定10分钟。也可根据需要选择其它的固定方6.式。

  5.冲洗 PBS洗,5分钟×3。

  6.内源性过氧化物酶的阻断 用3%过氧化氢孵育5~10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。

  7.冲洗 PBS洗,5分钟×3。

  8.以下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤(滴加一抗开始)。

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