冰冻切片的免疫组化染色步骤

2023-03-14 10:23:44

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　　冰冻切片的免疫组化染色步骤

　　1.速冻组织将组织块平放于软塑料盖或特制小盒内（直径2cm），如组织块小可适当的加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时就开始气化沸腾，此时小盒保持原位不要浸入液氮内，大约10-20秒组织即立刻冰冻成块。

　　2.切片取出组织冰块迅速置入-80℃冰箱留着备用，或置于恒冷切片机冰冻切片。冰冻切片4~8mm。

　　3.保存冰冻切片后如不染色，吹干，储存低温冰箱内，或进行短暂预固定后储存冰箱内保存。

　　4.固定室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟。也可根据需要选择其它的固定方6.式。

　　5.冲洗 PBS洗，5分钟×3。

　　6.内源性过氧化物酶的阻断用3%过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。

　　7.冲洗 PBS洗，5分钟×3。

　　8.以下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤（滴加一抗开始）。