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怎么细胞提高转染效率(有效优化转染条件)

发布时间:2022-11-02 10:37:48 阅读:1642次 来源:百度学术

  细胞转染是将外来核酸RNA或DNA等小分子物质转移到健康细胞中以产生“转基因细胞”的过程。在转染过程中,外源核酸链进入健康细胞后,核酸与细胞中现有的DNA结合,形成一个转基因细胞。在进行有效优化转染条件之前,我们首先需要了解细胞转染的过程,这样才能达到事半功倍的效果。

  根据细胞转染过程的不同可以分为以下几种:

  (1)生物转染——也被称作转导,指通过病毒感染方式将DNA 整合到宿主细胞核中进行复制;

  (2)物理转染——这种方法是基于电流、激光的转染方法。电穿孔和细胞注射是物理转染常用的方法,它们能够完成核酸的递送。物理转染可能会对细胞膜造成一定程度上的破坏,因此对于生长条件要求比较高的细胞可能会造成细胞死亡;

  (3)化学转染——目前当下应用较为普遍的方法,通常带有正电荷的阳离子聚合物能有效地与带负电荷的核酸结合,这两者相互吸引,最终核酸沉积在细胞中的细胞转染方法,是一种比较简便的转染方法。

  由此,我们可以对细胞转染效率的影响因素作出总结:

  (1)细胞活力:对于健康的细胞群,合适的转染方法的效率必然也是较高的,反之,转染效率也会相对较低,甚至得到误导性的结果;当然,不同的细胞类型也会影响转染效率,有些细胞本身就很难进行转染,而有些则易转染,所以转染效率存在差异;

  (2)细胞融合度:融合度与细胞密度不同,融合过多或者过少都会影响细胞转染的接受程度;

  (3)核酸类型:通常,不同核酸的复杂程度不同,对于核酸复杂的类型,转染过程肯定是困难一些,效率也会更低;

  (4)转染方法:不同的转染方法的效率是不一样的,需要根据细胞群选择合适的转染方法。

  结合细胞转染过程和影响因素,我们可以从以下几点入手提高转染效率:

  (1)培养高活力的健康细胞群

  细胞活力是细胞转染的基础之一,可以利用细胞分选仪辅助培养健康的高活力细胞群

  (2)有效的核酸纯度并避免RNA酶污染

  细胞转染的过程需要确保引入细胞的DNA 和 RNA 尽可能接近同质。 此外,由于RNA 酶普遍存在,需要我们确保每个步骤不受RNA酶污染非常重要 。

  (3)适宜的细胞密度

  适宜的细胞密度也会影响细胞转染的效率,大量细胞接触面会受到抑制,很容易造成较低的转染率。

  (4)合适的转染试剂

  针对不同的转染方法和细胞群类型,选择合适的转染试剂对细胞转染实验的成功是至关重要的


本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1738.html

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