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动物细胞培养中的一些常见问题

2022-11-02 10:32:17
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  动物细胞培养是生物学基础实验中的基础,养不好细胞,后续的实验都难以开展。而细胞培养中也时常会有各种状况发生,例如细胞生长缓慢、细胞不贴壁等,那么它们可能的原因都有什么呢?让我们一起了解下吧!

  细胞生长缓慢

  细胞生长缓慢可能原因:

  培养液及培养方法有误;更换不同培养液或血清也可能导致生长缓慢。

  培养液中一些细胞生长必须成分如生长因子耗尽或缺乏。

  培养物中有少量细菌或真菌污染;

  接种细胞起始浓度太低;

  细胞老化;

  支原体污染。

  细胞生长缓慢解决方法

  检查培养液和培养方法是否正确,比较新培养液与原培养液成分,让细胞逐渐适应新培养液;

  换入新鲜配置培养液,或补加生长因子;

  用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物;

  增加接种细胞起始浓度;

  换用新的保种细胞;

  分离培养物,检测支原体,如发现支原体污染,丢弃培养物。

  细胞不贴壁生长

  细胞不贴壁生长可能原因:

  支原体污染。

  培养瓶瓶底不干bai净。

  培养液pH 值过碱(NaHCO3 分解)。

  消化du液或培养液配制错误、过期储存、储存不当。

  细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)。

  接种细胞起始浓度太低或太高。

  细胞不贴壁生长解决方法:

  缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.

  分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发现支原体污染,丢弃培养物.

  注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.

  使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可).

  重新配置消化液或培养液.

  启用新的保种细胞.

  调节最佳接种细胞浓度.

  培养细胞死亡

  培养细胞死亡可能原因:

  培养箱内无CO2;

  培养箱内温度波动太大;

  细胞冻存或复苏过程中损伤;

  培养液渗透压不正确;

  培养液中有毒代谢产物堆积。

  培养细胞死亡解决方法:

  检测培养箱内CO2;

  检查培养箱内温度;

  取新的保存细胞种;

  检测培养液渗透压;

  换入新鲜培养液。

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