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如何清除病毒收获液中的支原体?

2022-11-02 10:43:45
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  现在,病毒性疫苗工业有了很大的发展,包括人用和兽用疫苗。在品控上,我国药典有详细的规定。其中,规定了生产用细胞的培养上清、病毒收获液、检定细胞等不得含有支原体。

  对于珍贵的病毒收获液,如何发现有支原体存在,是否可以清除呢?传统有采用抗生素的方法,但它只是对支原体产生抑制,并不能持久的成功的祛除,下面可以给您提供一种方法,它可以真正杀死支原体,并且只需处理一次即可。它是采用生物物理学的方法,不会导致支原体耐药株,处理后也容易再祛除。

  这便是采用Mynox®。Mynox®是全球惟一一款直接杀除支原体的试剂。它来自枯草杆菌提取物,可特异性地与支原体膜结合,改变支原体膜通透性,从而使支原体在2-3小时内破溃死亡。

图例

  下面介绍具体操作方法:

  一、对于无包膜的病毒,支原体去除流程如下:

  注意:冻存或新鲜的不含细胞和细胞碎片的病毒悬浮液可进行支原体杀除。病毒的滴度不影响去除效果,

  1. 在1.5ml无菌并带有安全密封性的反应管中,加入1ml不含胎牛血清的细胞培养基和100 µl Mynox®并混合。

  2. 将125 µl 病毒液(胎牛血清如含有,其浓度不要高于8%)加入到上述混合液中。注意:混合液应浸湿反应管的所有内表面。

  3. 室温静置2小时,并轻轻摇匀。

  4. 加入细胞培养基,使Mynox®稀释10倍,以终止反应。这一步可通过将混合液加入到待扩增培养的细胞培养物中,同时对病毒进行繁殖。终体积应为混合液体积的10倍。

  注意:

  待扩增培养的细胞培养物要先检测一下是否有支原体污染。

  二、对于包膜病毒,支原体的去除流程如下:

  包膜病毒外层的膜成分与支原体膜相似,也和Mynox®结合。这些病毒也容易被Mynox®灭活,具体依据Mynox®的浓度和作用时间。为保证去除支原体后的病毒液能用于进一步的繁殖,病毒的初始滴度应高于106 TCID50。

  注意:冻存或新鲜的不含细胞和细胞碎片的病毒悬液均可进行支原体杀除。

  1. 在15ml无菌带旋盖的反应管中,加入4.4ml不含胎牛血清的细胞培养基。加入Mynox 100 µl,并混合。

  2. 将0.5 ml病毒液(如含有胎牛血清,最高浓度要不高于8%)加入到上述混合液中。以上总体积为5 ml。

  注意:混合液应浸湿反应管的所有内表面。

  3. 室温静置30min,并轻轻摇匀。

  4. 加入细胞培养基,使Mynox®稀释10倍,以终止反应。这一步可通过将混合液加入到待扩增培养的细胞培养物中,同时对病毒进行繁殖。终体积应为混合液体积的10倍。

  注意:

  待扩增培养的细胞培养物首先要检测是否有支原体污染。

  这个支原体去除过程,可多次用于病毒收获液中的支原体杀除,以确保所有支原体已祛除。

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