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PCR实验怎么做(聚合酶链式反应实验操作步骤)

2022-10-31 10:33:55
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  PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程,这一过程可以看作是生物体外的特殊DNA复制,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA,可用于基因分离克隆、序列分析、基因表达调控、基因多态性研究等许多方面。

  下面我们就来了解一下PCR的具体操作步骤吧~

   操作步骤  

  01提取RNA

  取适量的动植物组织或培养细胞,加入适量的RNAiso Plus后匀浆,室温静置5min

  4℃ 12000rmp离心5min,取上清

  加入1/5 RNAiso Plus体积量的氯仿,振荡混匀,室温静置5min

  4℃ 12000rmp离心15min,取上清

  加入 0.5-1倍RNAiso Plus体积量的异丙醇和适量的核酸助沉剂,振荡混匀,室温静置10min

  4℃ 12000rmp离心10min,弃上清保留沉淀

  用与RNAiso Plus等量的75%无水乙醇清洗沉淀

  4℃ 7500rmp离心5min,弃上清保留沉淀,开盖晾干3min

  加适量的DEPC水溶解沉淀,轻吹混匀

图例

  02逆转录

  逆转录采取20ul体系进行,使用Bio-Rad设备

  03扩增

  扩增采取50ul体系进行,使用Bio-Rad设备

图例

  04琼脂糖电泳


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