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细胞培养交叉污染如何确认(细胞培养的无菌技术实验)

2022-03-14 10:28:20
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细胞培养交叉污染如何确认

  交叉污染虽不如微生物污染普遍,但与HELA细胞及其他生长迅速的细胞系间广泛的交叉污染是个明确的问题,会造成严重后果。

  从声誉好的细胞库获取细胞系、定期检查细胞系性质及采用良好的无菌技术有助于避免交叉污染。

  通过DNA指纹图谱、核型分析和同位素分析可确认有无交叉污染。

细胞培养的无菌技术实验

  无菌技术可以防止细胞培养物和试剂受到环境中的微生物污染。

  实验重点解析

  01 无菌操作环境

  细胞培养应当在专门的细胞培养室内的层流安全柜中进行。

  安全柜或超净台在使用前后,用紫外 (UV) 灯对安全柜灭菌30分钟。

  实验前,应用 Trigene 消毒剂和 70% 乙醇对安全柜内部进行擦拭。

  实验操作时的实验服、手套和防护镜以及实验用具须经紫外照射消毒。

  工作区域应保持整洁,仅能放置当前实验程序所需的物品。

  02 无菌技术操作

  在安全柜内开始工作前,戴上手套并喷洒 70% 乙醇。

  放入安全柜内的设备或试剂应预先喷洒 70% 乙醇。

  使用超净台时,应划分区域,拿取物品按照从左往右(或从右往左)的顺序,避免实验器械不必要的交叉或触碰。

  切忌倾倒细胞培养基或其他试剂。应当使用无菌玻璃移液管或一次性塑料移液管来操作液体,并且每只移液管仅使用一次。

  尽管许多细胞培养试剂经制造商认证为无菌,但仍有可能在处理过程中受到污染。如有需要应对无菌试剂进行过滤(0.22 µm 过滤器)或高压灭菌。

  切忌在不用时将试剂瓶、烧瓶或平皿在超净台内敞开放置。

  仅在使用前打开容器,并且如果需要将盖子放置在安全柜的表面上,确保开口朝上。尽快更换盖子。切忌同时打开多个烧瓶、平皿或瓶子,这可能会导致交叉污染。

  03 个人卫生习惯和防护措施

  操作细胞培养物前后务必彻底洗手。穿着实验服、手套和防护镜,以保护自己免受任何有害物质的伤害并防止细胞培养物受到存在于皮肤和衣服上的微生物污染。


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