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做实验如何选择细胞系(选择细胞系的注意事项)

发布时间:2022-03-13 10:39:24 阅读:111652次 来源:百度学术

  为您的工作选择正确的细胞系是获得最可靠结果的关键。但是有这么多的选择,你如何选择合适的呢?希望这篇文章能让您走上正确的轨道,为您的研究选择完美的细胞系。

  不要仅仅因为它在文献中使用而选择

  一个常见的陷阱是选择一个细胞系,因为它是最熟悉的或在文献中经常使用的。但仅仅因为您刚刚阅读的那篇关于胰腺癌的精彩论文使用了一种特定的细胞系,并不意味着它将适合您的信号转导研究。

  例如,如果你想使昆虫受体去孤儿化,使用像 Sf9 这样的昆虫细胞系似乎是个好主意,但实际上,由于该细胞中表达的内源性受体,这可能导致许多假阳性线。

  请考虑它是否适合您的生物模型

  在您查看细胞系的任何其他方面之前,请确定它是否适合您的特定模型。物种、疾病和遗传学都是这里要考虑的关键因素。您是否正在研究特定的生物标志物或基因突变?如果您选择的细胞系不合适,那么您使用该细胞系进行的任何实验最终都可能毫无用处。审稿人可能对这类事情很苛刻!

  请考虑您要执行的实验

  如果您的实验需要大量细胞,您可能需要找到可以悬浮培养的细胞系。与贴壁(单层)培养相比,悬浮培养通常可以让您收获更多的细胞。这也意味着您不必担心进行胰蛋白酶消化。

  另一方面,特定实验(例如钙测定)需要贴壁细胞。有些细胞系可以同时培养为悬浮液和单层细胞,因此如果您需要两种细胞系用于不同的项目,那么其中一种细胞系可能更可取。例如,HEK293 和 Sf9 细胞两种方法都可以培养;然而,CACO-2 只能作为单层生长。相比之下,HeLa 细胞是作为单层培养的,但存在这种细胞系的特定变体,可以在悬浮液中生长。一些贴壁细胞系甚至可以“适应”悬浮生长,但这可能很棘手。

  您的实验可能需要快速分裂的细胞系,而不是生长缓慢的细胞系,因此最好检查您选择的细胞系的生长速度。分裂最快的细胞系之一是 EB66,它每 12-14 小时翻一番。Sf9 和 Sf21 等昆虫细胞每 24 小时左右翻一番,与 HeLa 相当(大约 23 小时)。不要误以为所有人类细胞系的生长速度都差不多——HEK293 每 36 小时翻一番,但 CACO2 大约需要 80 小时。

  另一个关键考虑因素是您的细胞对转染的适应性。HEK293 和 HeLa 细胞被认为易于转染,您可以使用多种方法(这些细胞系在研究中如此广泛使用的关键原因之一)。但是,如果您正在使用昆虫细胞系,则使用专为昆虫细胞设计的试剂(如 FlyFectIN™)可能会更成功。 [1] 其他一些细胞,包括几种人类癌细胞系,众所周知难以转染,因此可能不太适合细胞培养的初学者。

表1

  不要假设所有细胞系都有相同的培养要求

  一些细胞系具有非常基本的需求并且易于培养(对HEK293 细胞大喊大叫)。其他的则比较麻烦,比如小胶质细胞系。

  例如,特定细胞系(例如一些鸟类细胞)需要比标准 37 度稍高的温度,而其他细胞系(例如昆虫、鱼类或两栖动物细胞系)需要相当低的温度——如果是这种情况,您需要一个单独的培养箱保持在合适的温度。包含人体细胞的培养箱也需要添加 5% 的二氧化碳进行加湿,但是,昆虫细胞不具备这些额外要求。

  同样,一些细胞系需要专门的细胞培养基或其他试剂,这可能很昂贵。贴壁细胞系需要涂有聚赖氨酸的特殊烧瓶/板,这样它们才能正常附着和生长,而且成本也更高。在您决定之前将这些考虑因素纳入您的研究预算,因为它可能会在以后受到重创。

  细胞系的冷冻、解冻和储存也很关键。许多细胞系需要在存在冷冻保护剂(如 DMSO 或甘油)的情况下非常缓慢地冷冻并储存在 -80 o C,但必须快速解冻。确保您拥有能够在冷冻/解冻过程中保护珍贵培养物的试剂和设备,并进行研究,以防您使用的细胞系与“标准”的要求略有不同。

  购买经过验证的细胞系(或自己验证)

  您已经决定使用一种细胞系进行实验,而您的另一个实验室的朋友恰好使用相同的细胞系。最明智和最具成本效益的做法是询问他们是否可以向您发送他们的文化样本,对吗?

  错误的!始终从完善的生物储存库购买经过验证的细胞系。如果你不这样做,你就有可能得到一个与你想的不一样的细胞系。

  60 年代,一位研究 18 种不同细胞系的科学家报告说,几乎所有细胞系都被 HeLa 细胞污染。从那时起,无数论文被作者撤回,他们发现他们的细胞培养物不是他们认为的那样为时已晚。[2]

  如果您必须从另一个实验室而不是公司获取培养物,请确保尽快对其进行验证。我不能强调这一点。幸运的是,有许多技术可用于细胞系的鉴定。[3]

  确保它们无污染

  我对你说一句话。感染。

  细菌、支原体、病毒、真菌……您的培养物容易感染所有这些。从另一个实验室引入新的培养物会显着增加污染的风险,因此在验证它们时确保将它们隔离一周左右。偶尔调整一下您的无菌技术也是一个好主意。一个好的无菌技术将确保您不会污染您的其他培养物(或任何其他人的培养物)。

  既然您对如何选择正确的细胞系有了更好的了解,您可能想知道从哪里获得它。请继续关注有关购买细胞系的文章,即将发布!

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/933.html

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