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如何制作琼脂板(如何每次制作完美的琼脂板)

发布时间:2022-03-11 10:03:37 阅读:14682次 来源:百度学术

  制作琼脂板,无论它们是否包含 LB、M9、血琼脂或任何其他生长培养基,都是一个简单的过程。但是有一些更好的点会破坏你的实验,弄得一团糟,或者如果你弄错了只会给你带来不便。

  因此,让我们记录一下如何为那些刚接触细菌世界的人制作完美的琼脂板。

  按照这些步骤,您将能够制作出完美的琼脂板——没有结块、气泡或过多的水分——每次。

  每次倾倒完美琼脂板的8个技巧

  1.使用食谱

  根据配方配制培养基,然后加入所需量的琼脂粉(通常约为 1% w/v)并搅拌。如果在不搅拌的情况下进行高压灭菌,琼脂糖仍漂浮在液体顶部,则培养基中会出现琼脂糖蛋糕。有趣,但没用。

  配制琼脂时,仅使用瓶子体积的 3/4。当琼脂在微波炉中融化时,这允许气泡上升的空间(并且可以节省您清理微波炉中溢出的琼脂!)。

  2. 高压灭菌器

  将培养基高压灭菌 25 分钟。高压灭菌后,您当然可以将培养基琼脂混合物储存在钢化玻璃瓶中,然后在需要时将其在微波炉或水浴中融化。确保您使用钢化玻璃瓶,否则灾难(见 #2)可能会发生。

  处理直接从高压灭菌器中取出的热介质时,请记住使用耐热手套。

  3.冷静!

  将培养基琼脂混合物冷却至 55°C。为获得常规一致的结果,请在 55°C 水浴中冷却几个小时。琼脂在大约 50°C 时开始凝固。

  制作琼脂板时使用水浴意味着您可以始终将混合物冷却至略高于凝固温度。

  之前我用水浴,我只是在空气中冷却它,但不可避免地会忘记它,然后回来发现凝固已经开始了——块状的板不利于传播!

  4.补充它

  您现在可以添加任何抗生素或补充剂,并确信琼脂处于合适的温度,因为您已经在水浴中冷却了它。

  5. 对于盘子

  使用 100 毫米直径的盘子时,使用大约 30 毫升的琼脂培养基混合物来制作每个盘子。每个盘子中的琼脂培养基混合物越少,它们就越容易变干。

  30 mL 对于长期储存来说是一个很好的量,如果您打算相对较快地使用这些板,则 10-20 mL 就可以了。

  为了在制作琼脂板时保持一致性,我建议使用血清移液器。多吸 2–3 mL,以尽量减少将气泡吹入板中。

  确保在倾倒时注意不要污染培养基和盘子——在处理盘子时使用干净的手套(如丁腈手套),并且不要忘记您的无菌技术。在准备盘子时,使用明火(例如本生灯)帮助保持该区域无菌。

  6.让它设置

  如果盘子中有任何气泡,请将火焰短暂传递以将其弹出。经典错误:试图在盘子完全凝固和冷却之前移动它们只是自找麻烦。别管它们(也许在等待的时候欣赏你完美的琼脂盘)!

  7. 变干

  将板在层流罩中稍微盖上盖子干燥 30 分钟(或在 37°C 培养箱中 2-3 小时,或室温 2-3 天)。干燥板对于储存板和在其上生长菌落非常重要。

  如果您不擦干盘子,水分会在储存或孵化过程中蒸发并凝结在盖子上,给您带来可怕的湿盘子。在最坏的情况下,水分会影响细胞的电镀。

  当 30 分钟结束时,使用计时器提醒您——根据我的经验——很容易忘记你的盘子,然后回来发现你的盘子已经变成了琼脂薯片/薯片。可口。

  8.使用它或存储它

  倒入完美的琼脂板后,您可以立即使用它们或密封它们以备后用。您可以使用封口膜,或将它们堆叠起来并倒置存放在盘子进来的塑料袋或塑料套中,以便于存放。

  将盘子存放在 4°C 的冰箱或冷藏室中。指南建议在大约 2 到 4 周内使用琼脂板。

  根据您添加的添加剂,准备好的板的保质期可能会更短 - 请确保在开始之前检查这一点,这样您就不会浪费时间(和资源)制作太多的板或最终受到污染在你的盘子上!

  一种快速标记板的方法是为您倾向于使用的每种抗生素和培养基类型设置颜色代码(例如,红色代表氨苄青霉素,黑色代表卡那霉素,绿色代表 LB,蓝色代表 M9)。

  堆叠盘子并使用适当颜色的实验室标记在整个堆叠中画一条线。确保您将颜色代码放在手边。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/929.html

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