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如何准备组织学载玻片(载玻片的配制步骤)

发布时间:2022-03-11 10:33:40 阅读:14802次 来源:百度学术

  如果您参与生物学研究,很可能在某个阶段您已将组织标本提交给组织学实验室。不知何故,他们神奇地为您制作了精美的载玻片——每张载玻片都包含您的标本的薄片,可以进行显微镜评估。

  您有没有想过组织学技术人员是如何准备这种组织学载玻片的?继续阅读组织学载玻片制作的五个重要阶段。

  组织学玻片制备的五个步骤

  1. 组织固定

  载玻片准备从组织标本的固定开始。这是组织准备中的关键步骤,其目的是防止组织自溶和腐败。为获得最佳结果,您的生物组织样本应在采集后立即转移到固定剂中。

  尽管固定剂的种类很多,但大多数标本都固定在 10% 中性缓冲福尔马林中。福尔马林与标本的最佳体积比应至少为 10:1(例如,每 1 cm 3组织 10ml 福尔马林)。这将使大多数组织在 24-48 小时内得到充分固定。福尔马林容器应加盖、防漏,并正确贴上标签。

  2. 标本转移到卡带

  固定后,使用手术刀修剪样本,使它们能够放入适当标记的组织盒中。标本不应该太大以至于它们会填满盒子——它们被修剪以免接触边缘。此外,它们不能太厚(理想情况下它们应该小于 4 毫米),否则,当盒盖关闭时,它们可能会“变形”。然后将填充的组织盒储存在福尔马林中,直到处理开始。

  3. 组织处理

  通常使用石蜡块将组织加工成薄的显微切片,如下所示:

  脱水,包括将您的标本浸入浓度越来越高的酒精中,以去除组织中的水和福尔马林。

  Clearing,其中使用有机溶剂(如二甲苯)去除酒精并允许石蜡渗透。

  包埋,用包埋剂(通常是石蜡)浸润标本。组织被一大块熔化的石蜡包围,形成现在称为“块”的东西。一旦块凝固,它提供了一个支持矩阵,允许非常薄的切片。

  4. 切片

  您的组织标本现在可以切割成可以放在载玻片上的部分。

  从块的表面去除蜡以暴露组织。

  切片前将块在冷藏板或冰盘上冷却 10 分钟。

  切片机用于以条带的形式从块上切下极薄的组织切片。

  切片机可以预设为切割不同的厚度,但大多数组织的切割厚度约为 5 µm。您可以在此处发现更多切片组织切片的方法。

  切割后,将组织带小心地转移到温水浴中。在这里,它们可以漂浮在水面上,然后可以被舀到放置在水位下方的滑梯上。带电的载玻片最适合这个过程——它们可以提高组织对玻璃的附着力,并有助于减少染色过程中切片从载玻片上洗掉的机会。

  载玻片应清楚标记,然后在 37 o C 下直立干燥几个小时,以轻轻融化多余的石蜡,使组织切片保持完整。

  5. 染色

  大多数细胞是透明的,未染色时几乎无色。因此,组织化学染色剂(通常是苏木精和伊红)用于提供与组织切片的对比,使组织结构更明显且更易于评估。染色后,使用光学级胶将盖玻片安装在载玻片上的组织样本上,以帮助保护样本。

  组织学载玻片准备结束

  如您所见,组织学载玻片制备并非轻而易举——它是一件相当复杂的艺术品!尽管您可能想学习如何做到这一点以帮助降低实验室成本,但我建议您三思而后行,为此目的将标本送到组织学实验室——尤其是在组织评估是重要部分的情况下你的学习。将这项工作留给经验丰富的组织学技术人员,您将节省大量压力和时间,并且您的载玻片将更容易评估。

  虽然组织学非常适合整个组织的低分辨率成像,但如果您想研究亚细胞结构,例如在研究脑肿瘤的变化时,它会受到限制。在这种情况下,需要更详细和更强大的技术,例如脑癌电子显微镜。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/928.html

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