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贴壁细胞和悬浮细胞免疫荧光染色方法(间接免疫荧光法)

发布时间:2023-05-21 10:27:27 阅读:16752次 来源:百度学术

  贴壁细胞和悬浮细胞免疫荧光染色方法步骤(以间接免疫荧光法为例)

  1细胞准备与固定

  (1)单层生长细胞:取对数生长细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,制成单细胞悬液。将细胞接种到预先放置几张6×22mm盖玻片的培养瓶或培养皿中,置二氧化碳培养箱培养1-3天,待细胞接近长成单层,取出盖玻片,进入PBS(0.01mol/L,pH7.4)洗2次,然后根据实验目的,选择适当固定剂固定细胞。常用固定剂有:95%乙醇(固定时间10-30min),丙酮(5-10min)等。

  (2)悬浮生长细胞:取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,或用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片,把细胞片浸入95%乙醇或丙酮中固定。

  2、将已经固定的细胞玻片放入盖片染色缸,用PBS振洗5min,取出吹干。

  3、滴加适当稀释的特异性抗体,置于湿盒内,37度保温30-60min或度冰箱过夜

  4、PBS振洗3次,每次5min,吹干。

  5、滴加适当稀释的荧光素标记抗体,置于湿盒内,37度保温30-60min。

  6、PBS振洗2次,每次5min,然后用蒸馏水振洗1次。

  7、50%缓冲甘油封片。

  【结果】

  在荧光显微镜下观察,阳性部位出现荧光,依荧光素种类不同呈现不同颜色的荧光,入FITC呈现黄绿色荧光,罗丹明B200呈现橙红色荧光。

  标本染色反应后应及时观察并照相。若无时间立即观察标本,可把标本放入4度冰箱保存。但应注意,过夜后特异性荧光减弱30%,一周后则减弱50%。如果用聚乙-烯醇封片,可保存较长时间。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/2349.html

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