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如何进行贴壁细胞和悬浮细胞的冻存与复苏

发布时间:2023-05-21 10:29:03 阅读:12382次 来源:百度学术

  为了防止因污染或技术原因使长,期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,*的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完,全停止状态,故可以长,期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,易招致细胞的严重损伤。

  一、细胞的冻存:为避免污染造成的损失,zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳细胞。冻存细胞,细胞应该特性化并检查是否污染。

  有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基,成分可能如下:

  ◆包含10%甘油的完,全培养基,

  ◆包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完,全培养基,

  ◆50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基,或

  ◆50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。

  对于无血清培养基,一些普通的培养基成分可能是:

  ◆50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基,或

  ◆包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养BSA的新鲜无血清培养基。

  1.悬浮细胞

  ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长,期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到zui小体积,不要搅乱细胞。

  ●以1×107到5×107细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中,再次悬浮细胞。

  ●分装进冻存管,将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。

  ●细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。

  2.贴壁细胞

  ●使用分离试剂从基层分离细胞,分离时尽可能温和,使对细胞的损伤减少到zui小。

  ●在完,全生长培养基中,再次悬浮分离细胞,确定有活力细胞数。

  ●以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到zui小体积,不要搅乱细胞。

  ●以5×106到1×106细胞/ml密度,在冻存液中悬浮细胞。

  ●分装进冻存管,将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。

  ●细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/2350.html

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