首页首页>>百越资讯>>行业资讯

实验外包：Real Time PCR引物设计原则

2021-08-17 03:43:21

访问量：110972

　　荧光定量PCR(Real Time PCR)引物设计目的是让目的基因按照理论值进行扩增，对非特异性反应和引物二聚体要求严格。

　　相关教程：学会这一招，3分钟搞定qPCR引物设计

　　Real Time PCR引物设计原则：

　　★扩增片段大小

　　80-150 bp(尽量限制在300 bp以内)

　　★Primer长度

　　17-25 base

　　★GC含量

　　40-60%(最好45-55%)

　　★★★Tm值

　　两条引物的Tm值尽量接近，应用专用软件计算Tm值

　　★序列

　　整体上碱基不能过偏

　　个别部分避免GC rich或AT rich(特别是3’ 端)

　　避免T/C连续，A/G连续

　　★3’末端序列

　　3’末端避免GC rich或AT rich

　　3’末端碱基最好为G或C

　　3’末端碱基尽量避免为T

　　★★★互补性

　　引物内部或两条引物之间避免3 base以上的互补序列

　　引物3’末端避免2 base以上的互补序列

　　★★★特异性

　　使用BLAST检索，确认引物特异性

　　★★★RT-PCR用引物

　　尽量在Exon junction上设计引物，限制基因组DNA扩增

　　注：★表示重要程度，★越多表示越重要，设计时要优先考虑；此外，知恩生物还可以为您提供专业的荧光定量PCR(Real Time PCR)技术服务。

动物实验：力竭运动动物模型实验外包：Transwell实验步骤有几种

文章推荐

细胞培养成功的关键因素（细胞培养所需的因素有哪些）

2023-04-28

1、无毒和无菌是体外培养细胞的要条件。为保，证细胞能在体外环境中生···

不同实验动物用药剂量换算的5种常用方法！

2024-09-13

一、按体表面积直接换算法l人的体表面积（m2）=0.0016*身高（cm）+0.···

移液的步骤和注意事项

2022-05-11

移液的一致性是实验重复性好的关键。移液时必须保持平稳、一致的速度···

流式细胞凋亡检测结果分析（细胞凋亡检测方法及数据解读）

2023-11-03

流式细胞凋亡检测是一种通过流式细胞仪技术实时监测细胞凋亡的方法。···

中科院1区，IF=11.4！中山大学刘海英团队揭示YTHDC1延缓细胞衰老的重要机制！

2024-10-22

细胞衰老是对许多不同的触发因素的反应，包括DNA损伤、端粒功能障碍、···

顶刊一区15.1！且看杜克大学王小凡团队带来的“支链氨基酸代谢+衰老”王炸组合！打开课题新思路（附技术路线）

2024-10-22

近年来，支链氨基酸代谢及其调控由于其广泛且深刻的疾病关联性，成为···

这9种常用的细胞转染方法，你都了解吗？

2024-10-16

细胞转染技术在生命科学研究中具有广泛的应用，例如基因表达研究、功···

如何破解“脂肪酸代谢”课题设计思路？！一篇IF=11.21的高分文献就够了~

2024-10-15

代谢重编程是当前生命科学/基础医学研究的一大热点，近些年以“代谢重···