细胞冻存是细胞保存的重要方法，在生化及临床研究工作中十分重要。细胞冻存是指利用冻存技术将细胞置于低温环境中，使细胞代谢率降低，暂时脱离生长状态，并将其细胞生物学特性保存起来，然后在需要的时候再复苏细胞的过程。所以，细胞冻存包括冻存和复苏两个环节。

　　细胞冻存可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而导致的细胞丢种，起到了细胞保种的作用。所以细胞冻存的操作十分关键，那么细胞冻存需要注意哪些事项呢？

　　先为了，大限度的保存细胞活力，细胞冻存遵循慢冻快融的原则。

　　细胞冻存的注意事项：

　　1、细胞冻存一天，好换一次培养液，并观察细胞生长情形。保，证细胞的生长状态良好，无污染，且活细胞百分比为90%以上。

　　2、冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂，DMSO应为试剂等，浓度为10%。

　　3、细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器，使温度每分钟大约降低1°C。

　　4、将冷冻的细胞于–70℃以下温度储存，装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存。

　　细胞复苏的注意事项：

　　1、取细胞时应做好防护措施，带好防冻手套，护目镜。防止细胞冻存管因气温急剧上升发生炸裂。

　　2、必须在1-2min内使冻存液完，全融化，避免复苏温度太慢，造成细胞的损伤。如果冻存管管壁较厚，隔热效果较好，可以适当提高水浴温度（37℃~40℃）。

　　3、提预定超净台，减少复苏后插在冰盒里等待的时间。

　　细胞冻存过程中，所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内进行。