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细胞培养的常见问题及解决办法(细胞培养中常见问题的解答)

发布时间:2022-08-27 10:44:18 阅读:13112次 来源:百度学术

细胞培养的常见问题及解决办法(细胞培养中常见问题的解答)

  1.何时须更换培养基?

  视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本资料上之更换时间,按时更换培养基即可。

  2.可否使用与原先培养条件不同之培养基?

  不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

  3.如何选用特殊细胞系培养基?

  培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,选MEM做粘附细胞培养、 RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

  4.培养细胞时应使用5 %或10% CO2?或根本没有影响?

  一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5 % CO2培养细胞。

  5.冷冻管应如何解冻?

  取出冷冻管后,须立即放入37°C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。

  6.怎样离心回收细胞?

  欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg (约1000rpm),5 - 10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡。

  7.细胞冷冻培养基之成份为何?

  动物细胞冷冻保存时经常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide)和90 - 95 %原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于 DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。

  8.应如何避免细胞污染?

  细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染的好方法。

  9.购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?

  研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

  10.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?

  研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。 培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久。

  11.什么培养基中可以省去加酚红?

  酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1525.html

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