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细胞培养时经常会遇见的一些问题(细胞培养注意事项及常见问题解答)

发布时间:2022-07-11 10:41:57 阅读:1452次 来源:百度学术

  养细胞是一件戳心戳肺的事情,你要像对待你女朋友那样仔细的爱护她,呵护她。如果你能意识到这一点的话,相信你的细胞肯定能养得好,下面我就向大家简单介绍一下大家在细胞培养时经常会遇见的一些问题。

  1、如何选用特殊细胞系培养基?

  培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

  2、什么时候更换培养基?

  视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。

  3、细胞培养中途是否能更换不同的培养基?

  不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

  4、细胞培养中途是否能更换不同的血清种类?

  不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

  5、保存血清的最好方法是

  建议将血清从冷冻箱取出后,先置于 2~8 ℃ 冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

  6、如何解冻血清不会使其质量受损

  建议将血清从冷冻箱取出后,先置于 2~8 ℃ 冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

  7、血清解冻后有絮状沉淀物怎么办

  血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。

  但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以 400 g 稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。

  8、为什么要热灭活血清

  加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养 ES 细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

  9、什么是FBS, FCS, CS, HS ?

  FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 两者都是指胎牛血清, FCS 是错误的表达, 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

  10、悬浮性细胞应如何传代处理?

  一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中, 稀释细胞浓度即可, 若培养液太多时, 可将培养角瓶口端稍微抬高, 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶, 加入新鲜培养基稀释至适当浓度, 重复前述步骤即可。

  11、将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速

  如果要回收动物细胞, 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10 分钟, 过高之转速, 将造成细胞死亡。

  12、如何配置细胞冻存液

  动物细胞冷冻保存时最常使用的冻存液是含5 - 10 %DMSO 和90 - 95 % 原来细胞生长所用的新鲜培养基均匀混合。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能, 故不可将DMSO 直接加入细胞液中, 必须使用前先行配制完成。

  13、

  冻存细胞时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

  冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial, 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜

  14、购买的细胞死亡或细胞存活率不佳的可能原因?

  研究人员在细胞培养时出现存活率不佳, 常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后, 加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C 太久。

  15、如何避免沉淀物的产生?

  我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:

  (1)  解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。

  (2)  解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

  (3)  请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。

  (4)  血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

  (5)  若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

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