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细胞稳转株构建病毒法

发布时间:2023-04-23 10:33:03 阅读:13102次 来源:百度学术

  病毒法

  ① 确定目标细胞系的相关信息,细胞的培养条件,细胞的增值速度,支原体污染情况;

  ② 预实验确定MOI值,可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据,设计梯度实验,摸索最适MOI;

  ③ 预实验确定筛选药物用量,常用的药物筛选有:puro、G418、潮霉素等;

  ④ 细胞铺板,将需要的细胞量接种于合适的培养皿中;

  ⑤ 细胞感染,通过接种的细胞量及预实验得来的MOI来计算添加的病毒体积;

  ⑥ 撤病毒,第二天,一般不超过24h换液;

  ⑦ 转染48h后选择对应的抗性药物进行筛选;

  ⑧ 筛选结束后进行单克隆化,选择阳性克隆进行培养。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/2252.html

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