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ELISA实验中如何优化包被

2023-03-25 10:36:54
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  将抗原或抗体固定在进程称为包被(coating)。换言之,包被便是抗原或抗体结合到固相载体外表的进程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的作用。接下来就向大家介绍一下在ELISA实验中优化包被的方法。

  一、挑选合适的包被抗原

  包被抗原可分为天然蛋白,重组蛋白和小分子抗原三类。天然蛋白通过直接吸附净化包装要求,许多杂质抗原的间接方法可以捕获数据包(和靶抗原反应物质如直接吸附在酶标板,然后通过抗原抗体的固相的特异性反应)。重组蛋白的纯化通常可以直接涂。小分子抗原如肽和一些小分子有机化合物,分子量太小,很难直接吸附在酶标板,通常和不相关的蛋白质如牛血清白蛋白,耦合,耦合的固相载体上的吸附。

  二、挑选合适的包被液

  一般是一个ph9.6碳酸盐缓冲液,如果包被抗原在碱性条件下不稳定,也可以用pH7.2磷酸盐缓冲溶液。

  三、选择合适的包被温度

  通常在4-8度为2小时通宵或37度的条件下,我们强烈建议4-8温度范围,有利于保持蛋白的活性。选择4层浓度包被固相载体和涂层性能改变物质的最佳浓度,总蛋白涂层浓度1-5ug/ml,应该明确涂层的最佳浓度的特异性抗原的实验测定。

  四、包被后的封闭选择

  封闭是否必要,取决于酶联免疫吸附模型和具体实验条件。一般来说,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作清洗彻底,无闭也可以得到满意的结果。测定及间接的方法,一般的封闭是必不可少的。常见的密封胶主要有0.5%牛血清白蛋白,10%胎牛血清,明胶1%,脱脂奶粉5%,abmart建议使用5%脱脂奶粉,但脱脂奶粉5%只适合短期使用,不要长期保存。

  在ELISA实验中,包被是非常重要的步骤,大家学会了优化包被的方法,会使实验的结果更加准确,所以大家要多加学习。


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