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细胞培养实验中有必要做血清热灭活吗?

发布时间:2022-07-26 10:21:46 阅读:13282次 来源:泽叶生物

  细胞培养是很多下游实验的基础,细胞培养的好坏会直接影响后续实验的成功和稳定,而血清作为细胞培养的主要试剂对实验的重要性不言而喻!

  血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题,价格不菲的血清中含有诸如生长因子、维生素、氨基酸等珍贵物质,而将它们置于56℃的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此,在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行,多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响,下面我们就对血清的热灭活来探讨探讨。

  血清灭活的目的是什么?

  1 血清热灭活目的主要是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。

  2 研究人员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的C1、C6仅达成年动物血清的1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的5-50%,至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验,也未发现有明显的溶血现象。多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程,也对热敏的补体有灭活的作用。

  3 热灭活另一个目的是为了使支原体失活。

  血清使用前是否都必须热灭活?

  1 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。而对于其他大多数的细胞来说是不需要热灭活血清的。

  2 很多情况下,热灭活并不会改善细胞的生长,却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染,从而给用户带来不必要的麻烦。

  3 建议,对血清进行灭活的用户,需要通过试验来证实其必要性。

  血清热灭活对细胞生长有帮助吗?

  细胞生物学家比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响,发现11株细胞中,热灭活对6 株细胞有负面影响(红)、3株无影响(绿)、2株有微弱正面改善(黄)

图例

  血清热灭活应该怎么操作?

  1 融化血清,并充分混匀其内容物。

  2 对照瓶装等量水,插入温度计。

  3 将血清瓶和对照瓶放入56℃水浴箱。

  4 当温度达到56℃,立即开始计时。

  5 每5分钟,旋转血清瓶一次,轻微规则摇晃,以使瓶中血清受热均匀一致。

  6 56℃,30分钟后,立刻去除血清。

  注意事项:血清灭活时,避免接触到加热管,防止受热不均匀,导致灭活失败,血清灭活后,冷水浴冷却。

  为什么血清灭活后产生大量沉淀?

  1 血清灭活后出现的沉淀大多数是纤维蛋白析出,属正常现象。灭活过程多次摇晃使血清受热均匀可以降低蛋白的析出。

  2 当血清在未完全化冻状态时直接置56℃水浴、灭活过程中局部受热过高、加热时间过长就会产生胶状沉淀,这样的血清质量严重受损,是无法继续正常使用的。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1409.html

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