1、培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子

　　通常情况下，当小伙伴购买细胞，并没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法制备培养基，使用实验室兄弟姐妹使用的培养基来培养细胞。解决方法一般是按照推荐的方法制备培养基，或直接购买培养细胞的培养基。

　　2、支原体、xi菌、真jun等污染:虽然培养基中通常添加双抗体(青霉素和链霉素)，但如果无菌操作观念不强，仍有可能造成污染。处理方法:如果有冷冻细胞，可以丢弃污染细胞。当然，丢弃并不是随意的，扔进垃圾桶。应按照实验室生物**规定进行。然后复苏培养物，建议培养箱完全消du。如果不冷冻，而且这种细胞非常珍贵，常用的方法是yao物:xi菌污染加5-10倍的抗生su;真jun污染加抗真junyao物;支原体污染再加上抗支原体yao物，具体yao物可以咨询，他们会更加专业。

　　3、许多细胞的生长依赖于密度。如果传代后细胞密度过小，也会影响细胞生长。这段时间没有什么特别好的，就是更换液体。如果细胞培养瓶为T75，则可以消化、离心、复苏，然后接种到T25瓶中。

　　4、冷冻细胞中添加DMSO(二甲基亚砜)的量不正确，没有逐渐梯度冷却。下一次恢复后的细胞总是坏的。处理方法:按推荐的冷冻保存方法制备冷冻液。部分细胞适合10% DMSO，部分细胞适合5% DMSO;严格遵循渐变冷却的原则，细胞恢复后迅速解冻。

　　5、换液间隔时间太长。一些小伙伴真的把细胞“佛”系生长。当他们想到它的时候，才会换下液体，相信一个句子。“你已经是一个成熟的细胞了。你应该学会养活自己，成长”。在这种情况下，细胞培养瓶中积累了大量的细胞代谢废物，影响细胞活性。推荐:勤奋点！

　　6、细胞的“消化”时间不宜过长，减少对细胞的损伤;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合钙离子，影响细胞粘附。zhi疗方法:控制细胞“消化”时间，尽量去除干净的胰蛋白酶和EDTA。

　　PH值:细胞需要在一定的PH值下生长，这个小朋友知道。但是很多时候PH值是我们忽略的东西，这也是小秋今天想强调的一点。随着使用时间的增加，我们使用的介质可能会慢慢变成碱性!(当然，它也可能变酸，但改变碱是常见的)。一般来说，过碱的培养基会影响细胞的生长。zhi疗:简单的方法就是更换新鲜的培养基!当然，如果你有时间和条件，你可以调整介质的pH值。