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细胞为什么会抱团,如何解决细胞生长抱团

2023-03-22 10:33:55
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  我们做细胞实验的时候经常会碰到细胞抱团的现象,有些时候细胞抱团对我们下一步实验没什么影响,但是当影响实验的时候就简直抓狂。当检测细胞克隆形成率、铺单克隆以及电转等,这时候细胞要是抱团了,得到的结果基本上都是不可靠的,那么细胞为什么会抱团呢?又该如何避免?接下来让我们一次性给小伙伴们讲清楚吧!

  细胞抱团的原因可能有:

  1、消化时间控制不当

  有些小伙伴不管什么细胞都消化3分钟左右,然后用手拍打培养瓶使细胞成片脱落,但有些细胞消化不完全,细胞和细胞之间的连接没有分开,这个时候就拍打下来很容易造成细胞聚团。

  也不可消化过度,圆形的细胞容易聚堆,想要通过后面的步骤吹打分开是很难的!

  正确做法:培养前充分了解细胞的特性,可向购买细胞的厂家咨询,也可在网上查询确定细胞的最佳消化时间。

  2、传代时操作不当

  传代时细胞吹打不均匀,没有将细胞团吹散。

  吹打太用力造成细胞死亡,细胞死亡释放的DNA与其他细胞形成黏性的细胞团。

  细胞离心速度过大或者离心时间过长。

  细胞长的太满才进行传代操作。

  正确做法:

  消化前加入适量缓冲液对细胞进行清洗,清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质。

  消化后吹打时上下左右吹打约10次左右,注意控制力度。

  确定细胞正确的离心条件,严格按条件执行。

  细胞汇合度在80%~90%即可传代。

  3、细胞状态不好

  细胞状态不好以及发生老化也可能造成细胞抱团。

  正确做法:及时换液或者传代,检查培养体系是否适合细胞。

  4、细胞接种不当

  细胞转移至培养瓶/皿时细胞分布不均匀,或者细胞接种密度过高。

  正确做法:

  细胞转移至培养瓶后可按倒8字形状摇匀(即∞)。

  但对于像96孔板这种小型培养皿,需要在接种前把细胞混匀,接种后不可再摇,否则很容易全部聚集在孔板的中间。若已经接种了发现不均匀,可用枪头轻轻吹打混匀。

  接种前进行细胞计数,按照正确的接种密度接种。


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