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人原髓细胞白血病细胞生长慢、状态差怎么办 (HL-60细胞)

2022-10-27 10:25:59
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  HL-60细胞(人原髓细胞白血病细胞)是一株早幼粒细胞,源自一位患有急性粒-单核细胞白血病的36岁白人女性。HL-60细胞自发分化,丁酸盐、次黄嘌呤、佛波醇、肉豆蔻酸、DMSO(1%-1.5%)、放线菌素D和视黄酸均可以促进分化。HL-60细胞表现出吞噬活性,并对趋化刺激有响应;HL-60细胞致癌基因myc表达阳性。

图例

  图1. HL-60正常生长图片

  养过HL-60的老师都知道,要想将这个细胞养好并不容易,细胞生长慢、状态差是较常遇见的问题,今天小普教您如何解决并预防。

  解决方法

  当细胞传代后生长速度慢且状态不佳时,可竖着培养直到培养基变黄,待细胞密度起来后,状态会有所好转。

  同时,若HL-60细胞状态很差,可采用半换液的方式:

  以T25瓶子为例,瓶子里有5mL培养基,竖起瓶子静置一段时间(竖瓶前拍拍瓶子,让轻贴底部的细胞团浮起来),待细胞沉底(肉眼观察细胞沉底情况),小心吸出2.5mL的培养基,转移到离心管,离心1000rpm 3~5min,用2.5mL新鲜培养基重悬后再放回原瓶。

图例2

  图2. HL-60处理前(左)HL-60处理后(右)

  图片由客户提供,仅供学习参考

预防方法

  要想将HL-60细胞养的更好,不仅要学会解决问题的方法,更要懂得如何预防。小普将从以下五点教您如何预防此类问题的出现:

  1、HL-60细胞在高密度下状态比较好,细胞状态好时会吸收一些细胞碎片;

  2、低密度时细胞状态很差,传代比例要控制,当培养密度达到1x106/mL左右时可传代,细胞状态不好时后面传代可以不用离心;

  3、DMSO会对HL-60刺激分化,建议复苏马上离心去除DMSO;

  4、悬浮细胞对血清要求高,选用优质血清培养;

  5、培养过程中尽量不动或少动培养瓶。


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