步骤：首先制作标准曲线（测定细胞具体数量）；其次进行细胞活性检测；最后进行细胞增殖-毒性检测。注意事项：先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

　　一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）

　　1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。

　　2、按照比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。

　　3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞的数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件必须要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）

　　二. 细胞活性检测

　　1、在96孔板中接种细胞的悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2）。

　　2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡）

　　3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

　　4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

　　5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度并不会发生改变。

　　三. 细胞增殖-毒性检测

　　1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。

　　2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

　　3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

　　4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

　　5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

　　6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

　　7、若暂时不测定OD值，就可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

　　注意事项：建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

　　有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数