低至45元!病理染色【夏日盛惠】活动正在进行中
资讯动态

怎么做cck8实验(附带实验步骤及注意事项)

2023-02-13 10:36:07
|
访问量:123402

  步骤:首先制作标准曲线(测定细胞具体数量);其次进行细胞活性检测;最后进行细胞增殖-毒性检测。注意事项:先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

  一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)

  1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

  2、按照比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

  3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞的数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件必须要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)

  二. 细胞活性检测

  1、在96孔板中接种细胞的悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。

  2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡)

  3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

  5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度并不会发生改变。

  三. 细胞增殖-毒性检测

  1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。

  2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

  3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

  4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

  5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

  7、若暂时不测定OD值,就可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

  注意事项:建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

  有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数

  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×
留言咨询

病理染色【夏日盛惠】活动正在进行中,点击查看活动详情。

欢迎前来咨询~