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培养细胞过程中有小黑点

2022-12-08 10:28:32
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  让我们先来看看细胞遭受小黑点入侵后的灾难现场。

图例

小黑点之所以这么令人头痛,是由于它的数量会随着培养时间的增加而不断增加,当数量多到一定程度的时候,就会对细胞的生长造成一定的影响,严重影响科研的进展。在显微镜下观察时往往表现为没有光泽,体积较小的黑色颗粒。

  小编这边结合自己多年细胞培养的经历和接触到的客户案例,跟大家分享下培养细胞过程中碰到过的小黑点。

  细胞碎片

  化学或者物理的强烈刺激(例如胰酶消化时间过长,吹打细胞太过用力等)往往会导致细胞死亡,产生很多的细胞碎片。在显微镜下进行观察时,可以看到很多呈不规则形态、没有光泽的颗粒粘附在细胞培养皿的底部。

  状态不好的细胞往往贴壁能力较强,因此切勿用移液器进行强力的吹打,从而损害了健康的细胞;另外,控制好胰酶消化的时间,只需保证大部分正常的细胞被消化下来就可以了,然后更换新的细胞培养皿。

  凋亡小体

  体外培养的动物细胞很容易受到培养环境因素的影响,例如营养成分的改变、氧的供给、毒素、细胞代谢产物的积累、pH、 剪切力、细胞密度及微生物污染等。这些环境的改变都有可能诱发细胞的凋亡,从而产生很多分泌的凋亡小体。凋亡小体大多游离在培养基中,但也有一些会通过暴露的核酸彼此之间相互黏连,从而形成一个棕色的凋亡小体团块,没有细胞光泽。

  建议:

  细胞培养的过程中一定要控制细胞传代的时间,不能让细胞"长过";不要使用过酸或者过碱的培养基进行细胞培养;选用内毒素含量较低的血清。

  血清中的沉淀

  磷酸钙是常见的一种沉淀物,通常会使血清出现浑浊,并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点,这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动,因此经常被误认为是微生物污染。

  建议:

  经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著增多,对于大多数的细胞而言是不需要进过高温灭活处理的。

  黑胶虫

  对于细胞培养过程中的小黑点到底是什么,目前呼声高的非黑胶虫莫属,但是小编查看了很多的资料,依旧不知道其为何方神圣。有人认为是从血清中来的一种原虫,有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白结晶,因此消灭黑胶虫的方式也是各式各样。

  建议:

  如果污染的细胞数量不是很多,建议直接丢弃,或者重新复苏细胞进行培养。

  支原体的污染

  黑胶虫的污染很难定性,大部分被黑胶虫污染的细胞都存在生长迟缓,培养基颜色没有明显的改变现象,更像是受到了支原体的污染。

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