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电转染实验常见问题解答(Entranster-E电转染试剂为例)

发布时间:2022-03-29 10:29:23 阅读:14432次 来源:百度学术

  一、HepG2细胞的电转染条件是什么?

  使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时HepG2细胞的电转染条件是:

  对于0.2 cm电转杯,细胞密度为5×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为170V,电容为950μF。

  对于0.4 cm电转杯,细胞密度为5×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μl,电压为250V,电容为950μF。

  二、Hela细胞的电转染条件是什么?

  使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是:

  对于0.2cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为130V,电容为950μF。

  对于0.4cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μl,电压为260V,电容为950μF。

  三、BHK-21细胞、Jurkat E6-1细胞的电转染条件是什么?

  使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21或Jurkat E6-1细胞的电转染条件是:

  对于0.2 cm电转杯,细胞密度为10×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为150V,电容为950μF。

  对于0.4 cm电转杯,细胞密度为10×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μl,电压为280V,电容为950μF。

  四、电穿孔实验时的细胞密度是多少?

  进行电穿孔实验时.,需确定每种细胞类型的最佳细胞密度,以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说,在含电转试剂的终体系中,电穿孔时的细胞密度一般在1-10×10^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞,最好是接近10×10^6细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞,建议的细胞密度为1-5×10^6细胞/ml。对于0.2 cm和0.4 cm的电转杯,每个电转杯的最终电转染液的体积分别为0.1 ml和0.25 ml。

  五、电转染实验时,对于指数衰减形式的脉冲条件是什么?

  对于Entranster-E电转染试剂,当使用0.4cm电转杯时,大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm电转杯时,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm电转杯的电穿孔实验,测试电压范围为200–300 V,电容范围为800-1000μF。首先,将电压常数保持在220 V,从750μF开始,以100μF的增量改变电容。随后,从200 V开始,以10 V的梯度改变电压,同时电容恒定。

  六、电转染实验时,对于方波形式的脉冲条件是什么?

  一般来说,方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定,即在保持电容不变的情况下,将脉冲长度减半,电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件,可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。当使用0.4cm电转杯时,大多数细胞类型的一般方波脉冲条件都在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm的电转杯,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。脉冲长度从10-20毫秒不等。

  七、电转染后细胞孵育时间是多少?

  每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染,最佳孵育时间一般为12-48小时,具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。

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