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免疫荧光染色结果怎么看?1分钟速解!

2024-09-18 15:09:10
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免疫荧光染色结果怎么看?1分钟速解!

免疫荧光染色等各种实验,生物医学人都知道是必须得会的基础实验!但它的结果图要怎么看呢?今天一起来解读吧~

一、定义&用途

免疫荧光染色

定义:免疫荧光图(免疫荧光染色结果图)是利用荧光标记抗体或抗原作为探针,与组织或细胞内特定抗原或抗体结合后,在荧光显微镜下观察得到的图像。通过这种方式,可以确定抗原或抗体的位置和分布。

用途:

蛋白质定位:荧光标记抗体可定位细胞或组织中的特定蛋白质,有助于理解蛋白质功能、细胞器结构和信号传导途径。

细胞生物学研究:用于细胞生物学研究,观察分析细胞内结构,包括细胞骨架、细胞器如线粒体、内质网、高尔基体,及细胞膜上的蛋白质。

疾病诊断:在临床诊断中用于检测病原体抗原或抗体,助于快速诊断疾病。它也用于检测肿瘤标志物和自身免疫性疾病的抗体。

细胞分选和纯化:免疫荧光技术可用于标记特定细胞,便于通过流式细胞术等方法分选和纯化,为细胞培养和功能研究提供高质量样本。

二、案例解读

免疫荧光染色

结果解读:使用TAM标记物Iba1进行免疫荧光染色表明,敲低WISP1可显著降低胶质瘤干细胞(GSC)来源的异种移植物中的TAM密度。

三、相关疑问与解答

1)为什么好多免疫荧光染色实验都要染DAPI?

DAPI染料能透过活细胞膜,但不能进入死细胞,因此可用于区分活死细胞,提升实验精确度。

它还能与免疫荧光技术结合,用于标记细胞核,帮助识别特定蛋白质或生物分子。

2)Merge是什么?

免疫英光中的Merge技术用于细胞和组织中染色体、蛋白质、细胞器等的可视化,通过合并使用不同荧光探针标记的分子图像来形成一张综合图像。

3)右边的统计柱状图是怎么做的?

使用ImageJ进行制作。

在统计免疫荧光时,我们关注的是图像中每个细胞的平均荧光强度。由于图像中细胞数量不一,不能仅以单张图片的荧光强度为准,而应测定所有细胞的平均荧光强度。

下面是具体操作步骤:

Step1-图像选择:打开lmageJ-File-Open-选择目标图像(结果展示包括目标蛋白、DAPI和Merge图像,统计时应使用含有目标蛋白的免疫荧光图像)

Step2-灰度转换:lmage-Type-8bit(对图像进行灰度转换,一般转换成8bit)

Step3-阈值设定:lmage-Adjust-Threshold…-调整荧光Threshold确定细胞荧光区域(因为图片中并非所有区域都有细胞,因此需设定阈值以确保红色的区域大小与实际绿色荧光图像相匹配,且不同组别的荧光图片也需采用统一的阈值)

Step4-调整参数:Analyze-SetMeasurements…-勾选以下选项-OK-得出定量结果(Mean)

Area

Mean gray value

Min&ma x gray value

Integrated density

Limit to threshold


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