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细胞实验:细胞传代培养方法

发布时间:2021-08-16 02:25:13 阅读:12922次 来源:本站

  细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代;进行一次分离培养称之为传一代。细胞传代培养根据不同细胞采取不同的方法。

  (1)贴壁细胞的消化传代

  贴壁生长的细胞多用消化法传代,传代中常用到二乙烯四乙酸二钠(EDTA)。EDTA能从组织生存环境中吸取Ca2+、Mg2+,这些离子是维持组织完整的重要因素。但EDTA单独使用不能使细胞完全分散,因而常与胰蛋白酶按不同比例混合使用,效果较好。

  消化传代的基本过程:

  1.吸除或倒掉瓶内旧培养液,向瓶内加入少量约1~2ml消化液(一般含胰蛋白酶、EDTA),轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面;

  2.然后在37℃环境下孵育1-3min,把培养瓶放置显微镜下进行观察,发现胞质回缩、细胞间隙增大后,应立即倒掉消化液,加入Hanks液冲洗一次以终止消化;

  3.然后加入少许培养液,用弯头吸管吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,使之脱落形成细胞悬液,以1:2或1:3的比例接种在新的培养瓶内。

  (2)悬浮细胞的传代1.悬浮生长的细胞可直接添加新鲜培养液,或离心收集,接种到新培养瓶。2.通常在4~5天需传代,一般以1:4稀释传代。

 

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/149.html

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