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细胞如何传代(实验步骤盘点)

2022-10-09 10:46:28
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  一、概念

  细胞传代:在细胞培养过程中,去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的培养基中,维持细胞的活力与增殖。细胞传代既可以扩大细胞培养量,也能够避免细胞因进入平台期而出现生长抑制甚至死亡的情况。

  二、实验步骤

  1. 贴壁细胞的传代:

  1) 倒置显微镜下观察细胞形态及密度,评估细胞的状态,以作为传代比例的参考。

上皮来源细胞A-549

  上皮来源细胞A-549

  显微镜下低高密度对比

  2) 提前紫外杀菌(至少30min为宜)操作台及实验材料。

  3) 注意无菌操作,在操作台中吸除或倒掉培养皿内旧培养液(尽可能去除干净,钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力)。

  4) 加入适量PBS缓冲液洗涤1~2次(此步骤可选)。

  5) 加入1~2 mL胰酶(以全部覆盖细胞为准),轻轻晃动培养皿,使胰酶充分接触细胞(建议:胰酶分装成适量,提前水浴复温到37℃)。

  6) 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞,当细胞变圆且大多数细胞脱落时,表明此时细胞消化适度(加入胰酶后,边计时边显微镜下观察,记录细胞消化的时间,供今后细胞消化参考)

  7) 加入2~3 mL 含血清完全培养液(也可以考虑使用该细胞本次的培养上清),终止消化,轻柔吹打,使细胞完全脱落。

  8) 收集细胞悬液,转移至离心管中,1500 rpm 离心5 min(必要时可以考虑,低速、短时间的离心有助于去除细胞碎片、细菌污染等)。

  9) 弃去上清液,加入适量体积含血清培养液,重悬细胞,根据细胞生长速度、是否有密度依赖性及计划传代的时间等特点,按照比例将细胞悬液分装入2个或多个无菌培养皿/培养瓶内,培养皿内可预先加入适量培养基。注意细胞充分混匀,保证细胞均匀分布。

细胞传代示意图

  细胞传代示意图

  2. 悬浮细胞的传代:可通过离心收集后用含血清的培养基直接传代。

  三、注意事项

  1. 严格无菌操作!!!

  2. 适度消化:提前复温胰酶37℃以及消化计时,易保证消化过程稳定。消化时间过长,容易影响细胞状态及活性,消化时间过短易多细胞成团,影响实验效果。

  3.吹打过程要轻柔,避免细胞液的洒溅。

  在生物细胞学研究中,有时需要体外培养和分析癌细胞。细胞要养好,就要用好血清,如Ausbian®特级进口胎牛血清,它的内毒素小于3Eu/ml,使细胞更健康,客户做实验更加顺利。

  文章来源于:人民医学声


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