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细胞实验:细胞培养中的污染检测与预防排除

发布时间:2021-08-16 02:11:59 阅读:12452次 来源:本站

  细胞培养过程中操作不当时,易引发微生物污染。微生物污染一旦明确,多数将无法救治。为了防止污染的蔓延,还应及时丢弃污染细胞。

  (1)霉菌和细菌污染

  霉菌和细菌繁殖迅速,能在很短的时间内压制细胞生长或排出有毒物质杀灭细胞,因此霉菌和细菌污染较易发现。

  霉菌污染后多在培养液中形成白色或浅黄色飘浮物,一般肉眼可见,较易被发现,短期内培养液多不混浊,倒置显微镜下可见于细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝,并悬浮飘荡在培养液中;很多菌丝在高倍镜下可见到有链状排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形态呈卵形,散在细胞周边和细胞之间生长。

  细菌污染后培养液短期内颜色变黄,表明有大量酸性物质产生,出现明显混浊现象;有时静置的培养瓶液体初看不混,但稍加震荡,就有很多混浊物漂起;倒置显微镜下观察,可见培养液中有大量细小的圆球状颗粒飘浮,有时在细胞表面和周围有大量细菌存在,细胞生长停止并有中毒表现。

  (2)支原体污染

  支原体污染是一个常见而又棘手的问题。支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2μm)并独立生活的微生物,因此可通过滤菌器,支原体对热敏感但对一般抗生素不敏感。支原体污染细胞后,培养液可不发生混浊,多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可由于传代、换液而缓解,因此易被忽视。实际上细胞已受到各方面潜在的影响,如细胞变性、DNA合成受影响等。个别严重者,可致细胞增殖缓慢,甚至从培养器皿脱落。

  为确定有无支原体污染可做如下检测:

  ①相差显微镜检测:将细胞接种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上,24h后取出,用相差油镜观察,支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间,类似布朗运动。 ②荧光染色法:荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258,可使支原体内含有的DNA着色,据此可检测支原体。固定细胞以Hoechst 33258染色,然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞周围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

  ③电镜检测:用扫描电镜方法简便快速,也可以利用透射电镜。

  ④DNA分子杂交检查或支原体培养等方法:检出率高,但方法较复杂。

  (3)病毒污染

  传代细胞带有潜伏病毒。Hela-HPV18,HSV,逆转录病毒等以前病毒形式整合细胞DNA。可通过细胞直接观察(血细胞吸附、包涵体等)、动物接种、异种组织培养物生长、电镜观察、免疫学方法及PCR方法检查。

  污染的预防

  防止污染,预防是关键1、器皿准备中的预防2、操作前的预防:超净工作台,培养皿,培养液,操作者3、操作过程中的预防:瓶口不能于工作台风向逆向;火焰烧灼灭菌,专管专用,试管斜位,不要交谈,完毕后整理、清扫

  污染排除

  1、抗生素排除:联合用药,预防性应用比污染后使用更好

  2、加温除菌:41oC,5~10h3、动物接种4、与Μφ共培养

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/150.html

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