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常用的细胞计数方法,细胞计数方法介绍

发布时间:2022-06-28 10:23:12 阅读:15432次 来源:百度学术

  常用的细胞计数方法

  一、原理:

  细胞悬液制备后,需要计算悬液中所含细胞数量;一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力,接种后能够生长增殖,所以在接种关应先检查一下细胞的活力。

  二、实验步骤:

  1. 计数板

  用96%酒精冲洗计数板后,用干净鹿皮擦净,另擦净盖片一张;把盖片覆在计数板上面,使之微微移向一侧,露出计数板台面少许,以便滴加细胞悬液;

  2. 染色

  取吸管1 支,伸入培养瓶中,轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后,立即吸细胞悬液少许,向另一离心管中滴入细胞悬液9 滴,再滴入台盼蓝染液1 滴,混匀,置2~3 分钟;

  3. 加悬液

  把计数板平放在显微镜台上,立即从计数板边缘轻轻滴1~2 滴已染色的细胞悬液,使之充满计数板和盖片间空隙中;

  4. 镜检

  镜下观察可见细胞分散各处,健康细胞胞体完整,透明不着色,凡着色细胞均为不健康者。计算四角大方格内的细胞数;压中线者只计算左线和上线者,右线和下线不计算在内(即仅计算压两个边的细胞)。

图例

按下公式计算

图例

  5. 接种培养

  通过计数测知悬液中细胞数后,可根据实验所需细胞数量向培养容器中接种。细胞接种数量随实验目的、血清含量和细胞生物性状而定;一般接种量在1~10x105细胞/毫升范围,实验周期短,希望细胞增殖较快时,接种量可大些。用含血清量大的培养液培养胚胎来源细胞、无限细胞系和恶性细胞系时,细胞接种数量不宜太大。

  三、注意事项:

  1. 向计算板中滴细胞悬液时要干净利落,勿令液面盖过盖片,加量要适当,过多易使盖片漂移,过少易出现气泡;不理想时应重做;

  2. 镜下计数时,偶见有由两个以上组成的细胞团,应按单个细胞数计算,如细胞团数占10%以上,说明消化不充分;功细胞数少于200 个/10 平方毫米或多于500 个/10 平方毫米时,均说明稀释不当,需重新制备细胞悬液,再重计数;

  3. 经常使用同一细胞在相同条件下工作时,对各种情况已做到心中有数情况下,可略去某些环节,如染色检查等;计算板计算细胞数法有一定误差,用作测定细胞生长曲线时,每一样品应重复计算4 次,取均值,较为可靠,若有电子细胞计数仪器当然更好;

  4. 体外培养细胞在悬液中呈圆形,平均直径8~10 um,当被接种到底物上生长时,经过延展后,则呈扁形,在底物上所占的面积按直径算可达20~25 微米,则1cm2的底物上可容纳4~5 万个这样的细胞,这是理论上的数值,但在实际应用中,当细胞达到80%汇合状态时便应做传代处理,因此细胞数量比上述理论数量少。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1310.html

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