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细胞原代培养注意事项,有关原代细胞培养常见问题

发布时间:2022-06-09 10:38:49 阅读:112792次 来源:普诺赛

  1

  分离的细胞增殖得很慢,怎么办?

  原代细胞对于起始接种密度是有要求的。另外,细胞接种到新的环境需要适应3-5天。建议保证合适的接种密度,48小时内静置培养细胞,不要移动细胞,避免破坏细胞微环境。

  2

  传代了20次,之后将细胞冻起来。假如再用这个细胞,这算第21代还是第1代呢?

  冻存操作只是让细胞在超低温环境下处于暂停状态,不会影响代数,复苏后是第21代

  3

  培养内皮细胞过程中,血清含量需要控制吗?

  需要控制。通常5%的血清,可以保证内皮细胞的正常增殖,同时抑制其他细胞的增殖。

  4

  原代细胞换液的时候,培养基预热是必要的吗?培养基不温热是否会影响细胞状态?

  培养基预热是必要的,减少环境的改变对细胞状态的影响,有部分贴壁不牢固细胞在受冷时容易收缩导致细胞漂浮,影响了细胞的状态,会延长细胞适应环境时间。

  5

  用P0滑膜细胞进行分选,滑膜间充质干细胞,没用到的细胞进行冻存了,可以把冻存的细胞拿出来继续分选吗?

  可以继续分选。建议观察一下冻存后的细胞和P0代形态是否有较大的差异,分选尽可能使用活性状态好的细胞;冻存后会有部分细胞死亡,影响细胞得率、活性。

  6

  上皮细胞老是长不起来,怎么解决?

  提高细胞密度,换用较小的培养皿培养;使用上皮专用培养基进行培养,培养瓶用0.1mg/ml胶原蛋白(鼠尾胶原)包被。

  7

  干细胞怎么增加传代代数,防止过早分化?

  保证干细胞适宜的培养条件,选用较好质量血清或者用无血清专用培养基培养,细胞的密度达到了传代要求及时传代处理,每次传代比例控制一致,不要频繁更改。

  8

  癌细胞系没有接触抑制,会叠着长是吗?

  是会叠着生长。但是大部分癌细胞生长还未叠起来,就因营养消耗过快,生存环境变差,导致部分细胞死亡。死亡的细胞会进一步影响正常细胞,导致癌细胞还未叠起来就全部死亡了。

  9

  胃腺癌细胞长得过快,有什么问题吗?

  癌细胞在培养条件适宜情况下增殖较快属于正常现象;检测癌细胞相关蛋白表达是否正常,若正常表达,进行常规培养即可。

  10

  胰酶需要预热吗?会使消化活性降低吗?

  胰酶需要在4℃的环境中保存,需要使其恢复常温再使用,消化时放37℃即可。不建议整瓶预热,反复多次预热会导致剩下的胰酶失活,影响消化活性。

  11

  小鼠星形胶质细胞能传多少代?

  纯度和细胞状态都较好情况下,传3-5代是没问题的。

  12

  只用EDTA消化细胞可以吗?是不是损伤就很小?

  可以只用EDTA消化细胞。因为其消化效果较弱,只建议用来消化贴壁不牢、极易消化细胞,贴壁牢的细胞没大的效果。

  13

  间充质干细胞,MSC需要用低血清培养基吗?消化也用特殊的消化酶吗?

  常见间充质干细胞可用含正常血清含量的培养基进行培养;根据实验需求,可选择无血清培养基培养液。一般使用胰酶消化,但是会对细胞造成累积损伤,建议使用消化效果更温和的消化液进行消化(干细胞专用消化液)。


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