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腺病毒常用的纯化方法(腺病毒需要纯化吗)

2022-04-04 10:40:49
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  腺病毒既可以用于体内实验,也可以用于体外实验。如果是用于体外实验,可以选择非纯化的病毒;当用于体内实验时,则需要进行病毒纯化。因为未纯化的病毒液中含有缺损病毒颗粒、细胞碎片、培养基等杂质,这些杂质如果被注入动物体内,会引起宿主显著的免疫学反应。另外,纯化浓缩后的病毒滴度更高,更适合体内注射。

  腺病毒常用的纯化方法为氯化铯或碘克沙醇密度梯度离心法,现以碘克沙醇密度梯度离心法为例,介绍一下腺病毒的纯化浓缩方法:

  1.腺病毒纯化

  (1)配制不同浓度的碘克沙醇;

  (2)取一个超离管,用电动移液器逐层加入不同浓度的碘克沙醇。

  (3)将处理好的病毒液加入到最上层;

  (4)超速离心,48000rpm 2.5h。离心前应将对应的超离管配平,误差控制在0.1g以内。

  2.腺病毒浓缩

  (1)离心完毕后,将超离管底用针头刺破,收集腺病毒所在层至15mL管中;

  (2)将收集的病毒液用冻存缓冲液稀释至体积15mL,然后用0.2μm的滤膜过滤;

  (3)将过滤后的液体置于一个15mL的超滤管中,3500g离心50min,一般离心2-3次达到预定体积;

  (4)将超滤管中剩下的液体反复吹打后吸至病毒储存管中,标明名称和日期。

  (5)将收集起来的病毒涡旋震荡混匀后离心,吸10μl病毒液进行滴度检测。

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