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细胞培养技术包括哪些(细胞培养的原理和方法)

2022-04-04 10:35:36
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  现代生物技术包括:基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展都与细胞培养有密切关系!!

  细胞培养技术的主要内容分为:基本概念、细胞生长、常用器材与试剂、细胞传代方式、细胞的冻存与复苏、细胞计数及注意事项等7个方面。

  今天小编主要从细胞培养实验的常用器材与试剂这部分与大家共同分享细胞培养技术的相关知识。

常用仪器

  1、超净工作台

  为细胞操作提供无菌环境。

  2、紫外灯

  紫外线消毒,主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒。

  3、滤器

  过滤除菌,大多数培养用液,如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌。

  4、电热干燥箱

  干热消毒(160℃,2h),主要用干玻璃器皿消毒。

  5、压力蒸汽消毒器

  湿热消毒,用途广。

  6、CO2培养箱

  CO2培养箱设定的条件:37℃ CO2,5%。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题:

  ①用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。

  ②保持培养箱内空气干净。定期消毒(90℃,14h)。

  ③箱内火菌蒸馏水:3000ml,蒸馏水槽中以保持箱内湿度,避免培养液蒸发。

  7、其它仪器

  倒置显微镜,酶标仪,微孔板震荡器,液氮罐,自动双重纯水蒸馏器,纯水仪等。

图例

常用耗材与试剂

  常用耗材

  培养瓶,吸管,培养板,冻存管,酒精灯

  常用试剂

  1、消化液

  ①胰蛋白酶:是一种黄白色粉末,用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制,常用的胰蛋白酶液浓度是0.25%。用滤器过滤除菌,如经费充裕可以直接购买已经配制好的胰酶,无需自己配制。

  ②胰蛋白酶作用机制:胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。胰蛋白酶液浓度越高,作用越强,但超过一定限度会损伤细胞。

  ③胰蛋白酶液消化时间:2-10 min。可用含血清培养液终止其对细胞的消化作用。

  2、培养基

  ①培养基:又称为培养液,是维持体外细胞生存和生长的溶液,分天然培养基和合成培养基。

  ②天然培养基:天然培养基有血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)。

  ✔优点:营养成分丰富,培养效果好。

  ✘缺点:来源受限。成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染。

  ③合成培养基:合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基,如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。主要成分:氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。

  ✔优点:标准化生产,组分和含量相对固定,成本低。

  ✘缺点:缺少某些成分,不能完全满足体外细胞生长需要,只能维持细胞生存,要想使细胞生长和繁殖,还需补充一定量的天然培养基(如血清)。

  3、血清培养基

  血清组分:①多种蛋白质(白蛋白、球蛋白、铁蛋白等);②多种金属离子;③激素;④促贴附物质,如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等;⑤各种生长因子;⑥转移蛋白;⑦不明成分。

  常用血清:胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等,其中以胎牛血清质量最好。

  血清质量好坏是实验成败的关键,优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体、病毒污染。血清的灭活(消除补体活性):56℃,30min。

  血清的消毒:过滤除菌。

  4、抗菌素

  抗生素的作用:在培养液配制完成后,培养液内常加适量的抗菌素,以抑制可能存在的细菌的生长。通常是青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。庆大霉素最终使用浓度为每毫升100单位,方便、广谱、稳定。

  5、完全培养基的组成

  基础培养基80%一95%,血清5%-20%,碳酸氢钠2.0g/L,青霉素、链霉素各100单位/毫升。


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