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细胞培养中究竟要不要加抗生素(细胞培养基中抗生素有什么用)

发布时间:2022-03-08 10:32:55 阅读:124612次 来源:百度学术

  提到细胞污染,大家想到较多的是细胞中的细菌、浑浊的培养基、培养瓶中的非法入侵者等。此外,病毒和化学污染对细胞培养物的健康也非常重要,确保细胞株不存在交叉污染也是获得可重复结果的关键因素。

  细胞培养过程中的污染问题到底有多普遍?

  FDA、ATCC及其他诸多研究表明,大约5-30%的细胞培养存在支原体污染;

  Merten的一项研究发现普通细胞株的病毒污染事件超过25%。

  控制污染的关键是如何检测出污染。

  细菌、真菌和酵母污染物通常是肉眼可见的,或许能迅速杀死细胞,但微妙的形态可能使重要的微生物入侵者像支原体一样难以被检测到。相比之下,传统光学显微镜无法检测到病毒,因此病毒污染通常是在观察到无法解释的分离、细胞健康较差的其他迹象或甚至是细胞死亡时才被发现的。

  如何控制和预防细胞污染?

  很多人会采用在细胞培养液添加抗生素的方法。但,这种做法是正确的吗?细胞培养中究竟要不要加抗生素?今天一起来看看几位科研老司机的建议:

  @小太阳:

  由于细菌和酵母等的污染很容易观察到,及时清理污染细胞可大大减少支原体、病毒的污染机会。潜在的支原体、病毒的感染会带来很大的危害。这些微生物的存在会影响细胞的理化性质,从而使研究者得到错误的实验结果。由于过滤技术的提高和超净台质量的改进,在规范细胞培养操作过程中引进污染的机会已经被大大减低。所以,建议常规的的细胞培养中不要使用抗生素。只有在培养污染源较多(如组织培养)或者非常珍贵的细胞株时才使用抗生素。

  @大大的实验狗:

  细菌的话最好排查污染源,抗生素不是好东西。如果一定要加的话,平时使用浓度是青霉素100U/mL,链霉素100μg/mL。如果是冲击治疗,可用10X(刚才配比为1X)。另外,实验室条件如果不好,可能引发真菌污染,可以尝试用两性霉素,具体浓度不记得了,因为这个毕竟用的少。

  @月亮:

  对付细菌和真菌的污染不应求助于抗生素,因为用久了我们知道它有一个选择效应,会产生抗药性的菌株。所以最好还是注意无菌操作,从源头上排除污染比较好。对付支原体污染,还是要用抗生素的,可以用环丙沙星,终浓度50μg/mL就可以,处理大约一周到两周再去掉环丙,我买回来的的两株细胞这样处理好了。

  @冷风吹:

  污染细胞最好还是丢弃,除非珍贵的细胞系可以用药救一救。我同时养七株不同的细胞都没发生污染……个人感觉还是操作问题。

  @可可:

  找到污染源并彻底清理是更好的处理方法,不要觉得可惜就老是想着要加抗生素挽救。肯定挽救不过来的,这次用庆大抑制住了,慢慢还是会筛选出抗性细菌的。能不加抗生素最好不要加,我平常养的细胞都不用抗生素,注意规范操作,极少会出问题的。

  @马云是谁

  污染不是靠用抗生素能解决的,一点用都没,完全没必要加。只要细胞房卫生做的好,试剂都干净,操作注意,根本不会有污染......

  最关键的是细胞房的管理要好,规定时间培养箱消毒,地面用酒精搽,房间里紫外线灯人走长明,一般就不会有污染了,这点我体会很深 !管理非常非常重要。

  @娜娜:

  1、最常用:青霉素、链霉素联合抑制细菌,即所谓的“双抗”,主要针对革兰氏阳性菌、阴性菌;对于细菌的感染也可用庆大或卡那霉素;

  2、如果真菌污染严重,可用两性霉素/制霉菌素控制;

  3、若为支原体污染,可用庆大霉素/四环素/红霉素;

  总结:

  抗生素虽然减少了可以观察到的细菌、酵母等微生物的污染机会,却会增加支原体、病毒等隐性污染的机会。

  因为细胞培养中污染主要来源于空气中的微粒和汽雾,而这些微粒和汽雾可以同时携带支原体、病毒和其他微生物。当抗生素使用时,可见污染被抑制而隐性污染又没被注意到,这样支原体、病毒等隐性污染的机会反而增加了。Barile的一项研究显示72%持续使用抗生素培养的细胞有支原体污染,而不使用抗生素培养的细胞支原体污染的比例只有7%。

  反过来如果不使用抗生素,支原体、病毒的污染往往会伴随细菌和酵母等的污染。由于细菌和酵母等的污染很容易观察到,污染细胞的及时清理就大大减少了支原体、病毒的污染机会。

  潜在的支原体、病毒的污染会带来很大的危害。这些微生物的存在会影响细胞的理化性质,从而使研究者得到错误的实验结果。在严重的情况下,甚至使一个实验室数年的研究白白浪费。

  由于过滤技术的提高和超净台质量的改进,在规范的细胞培养操作过程中引进污染的机会已经被大大降低了。所以比较合理的建议是,在常规的细胞培养中不要使用抗生素。只有在培养污染源很多(比如组织培养),或者培养非常珍贵的细胞株时才使用抗生素。

细胞培养基中抗生素有什么用

  提到配制细胞培养基,你能想到啥?

  营养成分和缓冲体系多数情况下都是必要的,但这抗生素,真的是必要的吗?有了抗生素,细胞就无惧污染了吗?

  虽然知道一直添加不好,但抗生素能避免细菌污染,实际上还是会一直加的。

  如果培养环境足够洁净,

  我觉得可以不用抗生素!

  关于抗生素在细胞培养过程中的意义,一直都有很矛盾,不用细胞容易污染,一直用对细胞状态也会有影响,到底该怎么办?今天我们就来一探究竟。

  抗生素对细胞的影响

  很多同学养细胞的手艺,都是从师兄师姐那里「传承」来的,由于没有办法做到绝对的无菌,所以从经验角度出发,前辈们都会告诉刚开始养细胞的同学,可以在配制培养基的时候,加入1%左右的双抗,防止细胞出现细菌污染(有些时候甚至出现离开抗生素,细胞没过几天立马就被污染的情况)。

  这就造成一些小伙伴在培养基中「预防性添加抗生素」,其实图的就是个心安,抱着「有了抗生素就不怕污染」的心态。但事实上,抗生素并不是「免死金牌」,真菌、支原体这些污染是它不能够对抗的,甚至滥用还会适得其反。

  这抗生素对细胞有什么影响呢?

  早在十几年前,就有很多报导指出β-内酰胺类抗生素及氨基糖甙类抗生素,对真核细胞培养有抑制增殖作用[1]。并且这种抑制增殖作用在原代细胞和干细胞等难养细胞上尤其明显[2-3]。2017年,加州大学Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上发表文章,呼吁在细胞培养过程中减少抗生素的使用[4]。他们发现抗生素(双抗:青霉素和链霉素)的使用影响人体肝细胞中基因表达与基因调控。其中有209个基因的表达发生了改变,特别是与药物和应激反应相关的基因。超过9,500个基因调控元件发生了变化,并且很多调节元件位于参与细胞分化,核酸酶活性和tRNA修饰的基因附近。虽然这些基因的数量在庞大的细胞基因库中不值一提,但这绝对不是一个应该被忽略的事件。

  虽然抗生素对真核细胞生长的影响机制至今尚未明确,但是为了细胞更好的生长,实验结果更加准确,实验数据更加稳定,在实验过程中尽量不要随意使用。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/913.html

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