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细胞培养室的灭菌与消毒(细胞培养室的使用规范)

发布时间:2022-03-08 10:28:35 阅读:13652次 来源:CellMax服务号

  细胞培养对无菌环境的要求较为严格。稍有不慎细胞全军覆没,损失惨重。为此保持细胞室的无菌环境尤为重要。细胞培养间的杀菌主要涉及空气的杀菌和操作台,培养箱的灭菌,其常见的方法如下。

  细胞房常规操作规范

  1、 每天使用细胞房前需提前将层流室及缓冲间紫外灯打开照射30min。

  2、 紫外灭菌消毒结束后通风15min,实验人员方可进入细胞房工作。

  3、 进入细胞房前先换专用鞋。

  4、 进入缓冲间穿换上专用实验服。

  5、 进入层流室须戴上手套、口罩,消毒后才可以进行实验。

  6、 每间层流室内最多可4个人使用,除实验外,避免长时间逗留。

  7、 实验操作时尽量避免交谈,走动。

  8、 始终保持细胞房内外地面、桌面的清洁,物品摆放整齐。

  9、 每天工作结束后,需关掉细胞房内不用的仪器、细胞房的灯、空调,离开时锁好细胞房的门。

  10、细胞房内的实验服、鞋帽禁止穿出实验室。

  11、细胞房内垃圾及时清理,每周对细胞房进行消毒清洁。

  培养箱使用

  1、从培养箱取放物品前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。

  2、培养瓶皿放入培养箱前,可以用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。

  3、按预定位置摆放培养器皿,方便查找,以免长时间敞开培养箱。

  4、普通培养中的细胞,若非实验需要,每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次。

  5、每次从培养箱拿取物品时,注意培养箱的CO2补给情况,及CO2钢瓶中气体使用情况。

  超净台使用

  1、超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒,所有物品放入超净台内使用前均应消毒。

  2、如需点燃酒精灯,需检查瓶中酒精是否足够,液面应占瓶高1/3-2/3。

  3、超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只,用于暂时存放废弃物,实验结束后将杯内垃圾倒入水池或垃圾桶中,并冲洗晾干备用。

  显微镜使用

  1、显微镜使用前,用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。

  2、离开细胞房时或较长时间不需使用时,及时关上电源,延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。

  细胞房消毒清洁

  1) 细胞房常用消毒剂

  1、清洁用水:纯净水

  2、消毒剂:

  75%乙醇

  0.2% 84消毒液:5L纯净水+10mL84消毒液

  0.2% 新洁尔灭:5L纯净水+10mL新洁尔灭

  2)细胞房清洁频次

  1、每周五进行一次清洁、消毒;消毒液要交换使用,每种消毒液使用一个月要更换另一种,防止微生物的耐药性。

  2、如有大物体搬进洁净区,需要对物体以及物体接触过的地方进行及时清洁、消毒

  3)清洁、消毒程序

  1、提前配制2组消毒液,几块50cm长的一次性医用纱布

  2、将待清洁区域内废弃物清理倒掉

  3、用一组消毒液+纯净水对门窗、玻璃、墙面、天花板、照明灯(两次清洁)

  4、用另一组消毒液+纯净水依次对细胞室设备、桌面、地面(两次清洁)

  5、清洁用具及时进行清洁,并存放到相应位置,不得随意乱放

  6、紫外照射过夜

  4)注意事项

  1、清洁时不能干扫或干擦,以免起尘,造成污染

  2、灯具清洁后要停数分钟后启用电源开关

  3、清洁标准为目检洁净,无废物,无印记,无污渍。

  如有污染细胞间整体灭菌方法

  1、甲醛熏蒸

  甲醛是一种高效能化学灭菌剂。不易燃、不爆炸、不腐蚀金属。它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性,使酶的活性消失。故有强大的杀菌作用。一般称作为“大消”,用来对细胞间进行彻底的消毒杀菌。但是甲醛是一种对人体有害的物质,并且细胞培养实验室一般空气流通都很差,甲醛的排出也很慢,至少要一周以上。如果要紧急使用的话,在甲醛灭菌完后,可以用等量的氨水中和空气中的甲醛。

  2、空气过滤(恒温恒湿装置)

  这是一种最安全,杀毒效果也最好的方法,只是费用较为昂贵。

  3、紫外线灯杀菌

  紫外线灭菌是用紫外线管照射进行的。波长在220-300nm的紫外线称为“杀生命区”,其中以260nm的杀菌力最强。紫外线作用于细胞DNA,使DNA链上相邻的嘧啶碱形成嘧啶二聚体(如胸腺嘧啶二聚体),抑制了DNA复制。另外,空气在紫外线照射下可以产生臭氧,臭氧也有一定的杀菌作用。紫外线透过物质的能力很差,适用于空气及物体表面的灭菌,与被照物的距离以不超过1.2m为宜,照射时间以紫外线灯管的功率大小、被照空间及面积大小,根据灭菌效果测定结果而定。由于上述各种情况的不确定性,导致紫外线杀菌效果不是很理想,一般需要过夜杀菌。此外紫外线对人体有伤害作用,不要在紫外线灯照射下进行操作。

  4、电子消毒灭菌器杀菌

  即臭氧灭菌。在高压电场作用下,电子管的内外电极发生强烈电子轰击,使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧在常温、常压下分子结构不稳定,很快自行分解成氧气(O2)和单个氧原子(O);后者具有很强的活性,能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应,从而靠氧原子的弥漫性扩散达到杀菌之目的,消毒时没有死角。消毒后空间的残留的多余氧原子只需30~40min则会自行重新结合成为普通氧原子(O2),不存在任何有毒残留物,故称无污染消毒剂,它不但对各种细菌(包括肝炎病毒,大肠杆菌,绿浓杆菌及杂菌等)有极强的杀灭能力,而且对杀死霉素也很有效。

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