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细胞实验外包-诱导细胞凋亡的通用方案

2021-11-28 10:40:45
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  诱导细胞凋亡可以通过多种方法在实验系统中诱导细胞凋亡,包括:

  用蛋白质合成抑制剂茴香霉素或 DNA 拓扑异构酶 I 抑制剂喜树碱处理细胞会诱导人早幼粒细胞系 HL-60 的细胞凋亡(Del Bino等, 1991;Li等, 1995;Gorczyca等, 1993; Darzynkiewicz等人,1992 年)。

  生长因子的撤除诱导生长因子依赖性细胞系的细胞凋亡。例如,培养中 PC12 细胞或交感神经元的 NGF 剥夺诱导细胞凋亡(Batistaou 和 Greene,1991)。

  用糖皮质激素地塞米松体外治疗诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡(Gavrieli et al . 1992; Cohen and Duke 1984)。

  Fas 或 TNF 受体通过各自的配体或通过与激动剂抗体交联的激活诱导 Fas 或 TNF 受体携带细胞的凋亡 (Tewari 和 Dixit 1995)。

  抗 Fas mAb 诱导 Jurkat 细胞凋亡

  在含有 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中,在 37°C的加湿、5% CO 2培养箱中培养 Jurkat 细胞。

  将细胞悬浮在新鲜培养基中,浓度为 1 × 10 5细胞/ml。在 37°C、5% CO 2培养箱中培养两到三天后,以 300–350 × g离心5 分钟收获细胞。

  在新鲜培养基中重悬细胞至 5 × 10 5 个细胞/ml,并添加抗 Fas mAb 至终浓度为 0.05–0.1μg/ml。在 37°C 培养箱中孵育 3-6 小时。作为阴性对照,在相同条件下孵育未经处理的细胞(无抗 Fas mAb)。(在此处停止进行均质测定,或将细胞铺在 96 孔板中。)

  以 300–350 × g离心5 分钟收集细胞。

  去除所有培养基并在 PBS 中重悬细胞。

  重复离心并将细胞沉淀在 PBS 中重悬至 1.5 × 10 6细胞/ml。

诱导细胞凋亡方案

  茴香霉素诱导的 HL-60 细胞凋亡

  用蛋白质合成抑制剂茴香霉素处理人早幼粒细胞系 HL-60 可诱导细胞凋亡。

  在 37°C的加湿 5% CO 2培养箱中,在含有 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中培养 HL-60 细胞。

  将细胞密度调整为 5 × 10 5 个细胞/ml,并用茴香霉素处理,最终浓度为 2μg/ml(溶于 DMSO)。在 37°C 下在加湿的 5% CO 2培养箱中培养2 小时。用等体积的 DMSO 处理阴性对照细胞,并在相同条件下孵育。

  收获细胞并在 PBS 中重悬至 1.5 x 10 6 /ml。

  星形孢菌素诱导 SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞凋亡

  在含 10% 胎牛血清 (FBS)、100IU/ml 青霉素和 100mg/ml 链霉素的 Ham's F12 营养素和基本必需培养基的 1:1 混合物中培养细胞,在 95% 空气和 5% CO 2的气氛中在 37 ℃ ℃。

  让细胞达到 70% 汇合。胰蛋白酶消化以从烧瓶中释放细胞,并在 45% MEM、45% F12K 和 10% FBS 中的 96 孔板中进行培养。

  24 小时后,用 100μl 3.125μM 星形孢菌素的 DMSO 溶液处理细胞。

  在进行基于细胞的检测之前,用星形孢菌素孵育 24 小时。

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