Jurkat 细胞凋亡检测方法

　　所需材料：

　　CaspACE™ FITC-VAD-FMK 原位标记（Cat.# G7461、G7462）

　　聚-L-赖氨酸包被的载玻片

　　anti-Fas mAb（Clone CH-11 MBL International Cat.# SY-100）

　　PBS

　　福尔马林

　　安装介质

　　荧光显微镜

　　1、将 Jurkat 细胞以 1 × 10 5细胞/ml 接种并在 RPMI-1640 + 10% FBS 中在 37°C、5% CO 2培养箱中培养 2-3 天，直到它们的密度达到 5 ×10 5 个细胞/毫升。

　　2、准备聚-L-赖氨酸包被的载玻片。用 0.01% 聚-L-赖氨酸溶液涂抹多室载玻片的每个室。部分干燥后，用 NANOpure® 水冲洗载玻片，然后风干。聚升赖氨酸包被的载玻片可以事先制备并贮存在4℃至7天使用前。

　　3、添加抗 Fas mAb（Clone CH-11，MBL International Cat.# SY-100）至终浓度为 0.1µg/ml。不要添加到控件。在 37°C 下孵育 3-4 小时。

　　4、将 CaspACE™ FITC-VAD-FMK 原位标记物以 10µM 的终浓度添加到 Jurkat 细胞中。保护细胞避光并在培养箱中孵育 20 分钟。在剩余的步骤中保持细胞免受光照。

　　5、以 300 × g离心5 分钟。

　　6、用 PBS 洗涤细胞，然后以 300 × g离心5 分钟。

　　7、将 PBS 中的细胞悬浮至 1.5 × 10 6细胞/ml。

　　8、将细胞添加到多聚-L-赖氨酸包被的载玻片中，并在室温下孵育 5 分钟，使细胞粘附在多聚-L-赖氨酸上。

　　9、在室温下（避光）在 10% 缓冲福尔马林中固定 30 分钟。

　　10、用 PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

　　11、将安装介质和盖玻片添加到幻灯片中。在荧光显微镜下分析。