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细胞实验外包-Jurkat 细胞凋亡检测方法

发布时间:2021-11-28 10:16:41 阅读:19102次 来源:百度文库

  Jurkat 细胞凋亡检测方法

  所需材料:

  CaspACE™ FITC-VAD-FMK 原位标记(Cat.# G7461、G7462)

  聚-L-赖氨酸包被的载玻片

  anti-Fas mAb(Clone CH-11 MBL International Cat.# SY-100)

  PBS

  福尔马林

  安装介质

  荧光显微镜

  1、将 Jurkat 细胞以 1 × 10 5细胞/ml 接种并在 RPMI-1640 + 10% FBS 中在 37°C、5% CO 2培养箱中培养 2-3 天,直到它们的密度达到 5 ×10 5 个细胞/毫升。

Jurkat 细胞

  2、准备聚-L-赖氨酸包被的载玻片。用 0.01% 聚-L-赖氨酸溶液涂抹多室载玻片的每个室。部分干燥后,用 NANOpure® 水冲洗载玻片,然后风干。聚升赖氨酸包被的载玻片可以事先制备并贮存在4℃至7天使用前。

  3、添加抗 Fas mAb(Clone CH-11,MBL International Cat.# SY-100)至终浓度为 0.1µg/ml。不要添加到控件。在 37°C 下孵育 3-4 小时。

  4、将 CaspACE™ FITC-VAD-FMK 原位标记物以 10µM 的终浓度添加到 Jurkat 细胞中。保护细胞避光并在培养箱中孵育 20 分钟。在剩余的步骤中保持细胞免受光照。

  5、以 300 × g离心5 分钟。

  6、用 PBS 洗涤细胞,然后以 300 × g离心5 分钟。

  7、将 PBS 中的细胞悬浮至 1.5 × 10 6细胞/ml。

  8、将细胞添加到多聚-L-赖氨酸包被的载玻片中,并在室温下孵育 5 分钟,使细胞粘附在多聚-L-赖氨酸上。

  9、在室温下(避光)在 10% 缓冲福尔马林中固定 30 分钟。

  10、用 PBS 冲洗 3 次,每次 5 分钟。

  11、将安装介质和盖玻片添加到幻灯片中。在荧光显微镜下分析。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/514.html

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