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转化克隆的筛选和鉴定实验方法步骤

转化克隆的筛选和鉴定实验原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。实验试剂1. LB培养基(加抗菌素)2. PCR用试剂3. 引物4. 质粒提取用试剂5. 酶切需要的限制性内切酶及其缓冲液，70%甘油(70%甘油，

柱离心法纯化质粒DNA实验方法

柱离心法纯化质粒DNA实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代

单克隆抗体的克隆化培养方法

单克隆抗体的克隆化实验原理经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失

冰冻组织切片制作步骤

冰冻组织切片制作实验试剂液氮，干冰，1％明胶，4％多聚甲醛，PBS，含1％NP-40的PBS，3％BSA／PBS稀释抗体，辣根过氧化物酶标记的二抗，DAB／金属盐试剂，3％过氧化氢，0.3％(W／V)氯化镍贮存液，Harris苏木精，乙醇冰冻组织切片制作实验设备载玻片，Whatman 1＃滤纸，低倍光学显微镜冰冻组织切片制作实

小麦总RNA是怎么提取的

小麦总RNA的提取实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入：5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片，迅速在液氮中研磨成粉末，转入已准备好的离心管中，剧烈震荡。4. 混匀，冰浴30min。

浅谈3D细胞培养，你知道哪些基础的3D细胞培养技术

日常的细胞培养大多指的是在培养皿中进行的，也就是2D培养，虽然它在细胞生物学中的研究具有重要的作用，但在模拟体内环境具有一定的局限性。人体是处于动态变化的，因而科学家们发展了3D细胞培养，将具有三维结构的材料载体与各种细胞在体外共培养，可以使细胞在三维空间内生长迁移形成三维的细胞-载体复合体，更有利于

细胞计数丨浅谈细胞计数之定量问题

根据国内标准GB/T39730-2020和国际标准ISO20391-2对于细胞计数的要求，细胞计数准确性的前提是定量问题。目前市场上的细胞计数均利用不同的技术体系，以满足不同程度的定量要求。目前常用方法有：细胞计数板、细胞计数仪以及流式细胞计数，下面我们就针对这几种不同方法对其定量问题进行讨论。首先是细胞计数板，细

pcr结果常见问题及分析

pcr结果常见问题及分析1. 如何有效设计引物（1）使用Oligo或Primer设计引物，在保守区内设计，长度一般在18-27bp，上下游引物Tm值最好是60-75℃，GC含量=40%-60%，引物自身及引物之间不应存在互补序列，避免发夹结构。2. PCR电泳无扩增条带（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当

蛋白质凝胶电泳注意事项

大多数蛋白质凝胶电泳是还原性条件下的十二烧基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE) 。＊样品准备还原试剂2－巯基乙醇或者二硫苏糖醇加在变性胶的样品缓冲液中，还原蛋白质中的二硫键，确保蛋白质维持在测定分子量所需的无规则卷曲状态。样品缓冲液分成小管，贮于－20℃ 。甘油浓度很高，足以防止样品冻

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