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2022-12-15
ChIP免疫沉淀实验流程(两种方法)
免疫沉淀实验流程目前主要有两种不同的ChIP实验方法:1.2 Cross-liking Chromatin Immunoprecitation (交联染色质免疫沉淀,X-ChIP)1.甲醛处理细胞,使 DNA-protein 的相互结合作用被交联固定。2.裂解细胞,得到全细胞裂解液。3.超声处理,将基因组 DNA 打断至 100-500bp。4.抗体免疫沉淀:在细胞
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2022-12-15
流式细胞术原理与应用盘点
流式细胞术(Flow cytometry,简称FCM)是一种基于流式细胞仪通过检测偶联荧光信号快速、准确、客观,并且同时检测单个微粒(通常是细胞或者颗粒)的多项特性技术,同时可以对特定群体进行分选。早期流式细胞术主要用于定性,后续慢慢发展为多参数定性、定量以及分选的技术。研究对象:颗粒性物质,如大量的临
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2022-12-15
流式细胞术样品制备方法
流式细胞仪检测分析的对象是细胞或者细胞样颗粒性物质,所以流式细胞术是细胞学的重要研究手段之一。而如何准备合格的样品是包装实验数据准确的基础,下面就讲一下如何制备流式样品。独立细胞样品制备如果研究对象是体外培养的悬浮细胞,则直接收集细胞于离心管中,离心沉淀细胞,然后用PBS重悬沉淀,取适量细胞
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2022-12-14
荧光定量PCR的原理
荧光定量聚合酶链反应(qPCR)是一种用于测定基因表达水平或病毒滴度的常用技术。该技术利用特殊的发光标记探针来检测特定的基因序列或病毒的存在。检测过程中,荧光探针会与基因序列或病毒的 RNA 结合,随着聚合酶链反应进行而发光。荧光强度与所检测到的基因或病毒的量成正比,因此通过测量荧光强度来估算基因表达水
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2022-12-14
细胞迁移与侵袭到底如何区分并有效利用(细胞行为大赏之迁移与侵袭)
细胞迁移是细胞在化学信号(如:趋化因子)的驱使下沿着浓度梯度从一个区域转移到另一区域的运动。细胞侵袭与细胞迁移比较类似,但是“侵袭”需要细胞穿过胞外基质层(ECM)或基底膜基质层(BME),在这个过程中细胞先酶解去除ECM/BME的阻碍,从而在趋化因子浓度梯度驱使下完成从一处到另一处的移动。从名字来看,这两种
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2022-12-14
miRNA与siRNA和shRNA的关系
前面我们谈到了来自基因组暗物质神秘的非编码长链RNA(lncRNA)、非编码环形RNA(ciRNA)、微小的RNA(miRNA),现在我们再来谈谈与微小的RNA(miRNA)有密切关系的小干扰RNA(siRNA)和短发夹RNA(shRNA)。介绍他们之前我们需要先了解下RNA干扰(RNAi)技术。RNA干涉(RNAinterference,RNAi)是有效沉默或抑制目标
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2022-12-14
常用的细胞凋亡检测方法
细胞死亡的方式主要有两种,包括细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)。细胞坏死是早已被认识到的细胞死亡方式,而细胞凋亡是近年来逐渐被认识且越来越受到重视的细胞死亡方式。两种死亡方式最重要的区别是细胞坏死会释放出细胞内溶物,引起炎症反应,而细胞凋亡不会暴露细胞内溶物,一般被吞噬细胞吞噬清除,不
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2022-12-13
双萤光素酶报告基因检测系统应用与操作流程
自1990年萤光素酶生物传感器技术诞生以来,单萤光素酶检测系统到双萤光素酶检测系统的发展,为科研人员提供了更为严谨的实验手段。双萤光素酶报告基因检测系统在单报告基因的基础上引入了“内参对照”报告基因,可以排除不同组之间细胞生长状况、细胞数目以及转染效率带来的干扰,起到校正的作用,从而使实验结果更为可
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2022-12-13
双荧光素酶报告基因检测原理及常见问题分析
荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称,其中具有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。由于两种酶底物和发光颜色的区别,且在动物体内无内源性表达,使其在双报告实验中得到广泛应用。检测原理
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